Análise da ultraestrutura do espermatozoide humano após liofilização

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Renata de Lima Bossi
• Orientador(a): Selmo Geber
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais
• Palavras-chave em Português: de transmissão; Microscopia eletrônica; Liofilização; Criopreservação; Sêmen humano
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AJSQ75

A criopreservação é uma técnica de fundamental importância para a medicina reprodutiva, pois permite o armazenamento de embriões excedentes, oócitos e espermatozoides para futuros tratamentos. Os crioprotetores são substâncias que tem a função de proteger as células contra a formação de cristais de gelo durante o congelamento e evitar que haja uma concentração letal de solutos mantendo a capacidade funcional das organelas celulares. Várias técnicas de congelamento seminal já foram desenvolvidas como: congelamento lento, rápido, vitrificação, congelamento em zona pelúcida vazia. O crioprotetor mais utilizado com essas técnicas é o glicerol. O armazenamento das amostras após congelamento usualmente é feito em nitrogêniolíquido. O uso do nitrogênio líquido leva a um custo elevado de manutenção, risco de contaminação cruzada entre amostras, dificuldades no transporte de alíquotas, além de requerer grandes espaços para armazenamento. A liofilização é uma técnicaamplamente utilizada para desidratação de produtos alimentícios, farmacêuticos, produtos biotecnológicos, vacinas, materiais biológicos e diagnósticos. Ela consiste na passagem do material do estado sólido diretamente para o estado gasoso sublimação - mantendo-se a temperatura suficientemente baixa sob uma baixa pressão. Ela vemsendo utilizada como alternativa ao congelamento convencional uma vez que a desidratação do sêmen elimina a necessidade do armazenamento em nitrogênio líquido ou em gelo seco. Além disso, o armazenamento, em longo prazo, teria um custo reduzido, pois menos espaço seria necessário para manter as amostras. O transportedessas amostras seria facilitado, sendo possível o envio desse material para qualquer lugar do mundo sem maiores complicações e riscos. Outro fato importante a ser considerado é que a liofilização já demonstrou inativar vírus envelopados e não envelopados. Estudos demonstram que a liofilização causa danos às estruturas espermáticas. O objetivo desse estudo foi analisar as ultraestrutura espermática apósliofilização do sêmen humano utilizando a microscopia eletrônica de transmissão. Foram utilizados quatro meios para liofilização: Freeze medium, Sperm Freeze Medium, mHTF e EDTA. As amostras foram congeladas no método convencional como controle. Vinte e uma amostras foram utilizadas no estudo. As análises de motilidade,concentração, vitalidade, fragmentação do DNA e microscopia eletrônica de transmissão foram feitas pré e pós-liofilização. A análise seminal após liofilização demonstrou danos causados na membrana plasmática, acrossoma, núcleo, peça média, mitocôndrias, estrutura de flagelo, microtúbulos, axonema e fibras densas ocasionadas pela técnica. Essas alterações variaram conforme o meio utilizado na liofilização. Todos os espermatozoides após liofilização demonstraram ausência de motilidade e DNA 100% fragmentado. Para utilização rotineira mais estudos são necessários, a fim de otimizar a técnica de liofilização.