Expressão, cristalização e determinação estrutural de macromoléculas biológicas por difração de raios X por monocristal

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Ludmila Maria Diniz Leroy
• Orientador(a): Carlos Basilio Pinheiro
• Banca de defesa: Angelo Malachias de Souza, Ubirajara Agero Batista
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais
• Palavras-chave em Português: difração de raios X; E2 de BPV-1; Cristalografia de proteínas; complexo NahK/NahL; SMase D
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/SMRA-BDKPM3

A função e a forma de proteínas estão intimamente ligadas. A compreensão da estrutura tridimensional delas se faz então necessária na elucidação detalhada dos processos biológicos nos quais elas participam. A cristalografia é uma poderosa técnica empregada na determinação estrutural de proteínas. Vasto conhecimento de física e bioquímica são necessários na capacitação de um profissional apto a trabalhar em todas as etapas do processo envolvido na determinação estrutural por cristalografia de proteínas. O objetivo do presente trabalho foi visitar todas essas etapas, que incluem expressão proteica por técnicas de DNA recombinante, a purificação e a cristalização da proteína, experimentos de difração de raios X por monocristal (XRD), processamento de dados, solução da estrutura e análises do modelo proposto. Para realizar todas as etapas, três proteínas foram estudadas: uma efingomielinase D (SMase D), o domínio E2 do papiloma vírus bovino tipo 1 (E2 de BPV-­¿1) e o complexo NahK/NahL. O trabalho com cada uma das proteínas cobriu partes distintas do processo de determinação estrutural. Foi feita a expressão, purificação, cristalização e experimentos de XRD com cristais da SMase D; a estrutura do domínio E2 de BPV-­¿1 foi elucidada a partir de dados de XRD e o modelo foi devidamente analisado; e os dados de XRD de um cristal de NahK/NahL, que indicaram uma desordem no mapa de densidade eletrônica experimental, foram devidamente reprocessados e analisados, resultando na proposta de um novo modelo para a estrutura do complexo.