Avaliação de uma proteína hipotética específica de Leishmania no sorodiagnóstico e desenvolvimento de uma vacina contra as leishmanioses

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Daniela Pagliara Lage
• Orientador(a): Eduardo Antonio Ferraz Coelho
• Banca de defesa: Daniel Menezes Souza, Mariana Costa Duarte, Jenner Karlisson Pimenta dos Reis, Juliana de Assis Silva Gomes Estanislau
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais
• Palavras-chave em Português: Sorodiagnóstico; Vacina; Epitopos; Leishmaniose Visceral; Leishmaniose Tegumentar; Proteína Hipotética
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-B58F9G

A leishmaniose é um complexo de doenças incidente no Brasil e no mundo, apresentando elevada morbidade e mortalidade. Nosso país responde por aproximadamente 95% dos casos de leishmaniose visceral (LV) nas Américas, sendo o cão o principal reservatório doméstico da doença. O sorodiagnóstico da LV canina (LVC) apresenta problemas relacionados à sua sensibilidade e/ou especificidade. No presente estudo, uma proteína hipotética específica de Leishmania, LiHyD, sob sua forma recombinante (rLiHyD), foi avaliada em experimentos de ELISA para o sorodiagnóstico da LVC. Três epitopos de linfócitos B da proteína foram sintetizados (Peptídeo-1, Peptídeo-2 e Peptídeo3) e também avaliados como marcadores diagnósticos. A proteína recombinante e o Peptídeo-3 mostraram os melhores resultados, tendo sido reconhecidos por anticorpos presentes em soros de cães com VL sintomática e assintomática, e não apresentaram reatividade cruzada com anticorpos presentes em soros de cães com doença de Chagas, ehrlichiose, babesiose ou de cães sem leishmaniose e/ou vacinados com a vacina Leish-Tec®. Na busca por se selecionar um antígeno candidato a compor uma vacina contra as leishmanioses, uma vacina baseada na combinação da proteína rLiHyD com saponina foi testada em camundongos BALB/c contra a infecção causada pelas espécies Leishmania infantum, Leishmania major e Leishmania braziliensis. A imunogenicidade da vacina foi avaliada e os resultados mostraram que os animais imunizados produziram níveis elevados de IFN-, IL-12 e GMCSF após o estímulo in vitro de esplenócitos com a proteína ou usando os extratos proteicos de L. infantum, L. major ou L. braziliensis. Após o desafio, os animais vacinados mostraram reduções significativas na carga parasitária em todos os órgãos e tecidos avaliados, quando comparados com os animais que receberam salina ou que foram imunizados apenas com saponina ou com a proteína isolada. A proteção obtida com a vacina rLiHyD/saponina foi associada com a produção de IFN- específica contra o parasito e dependente de IL-12, que foi produzida principalmente por linfócitos T CD4+. Nesses animais, uma redução na produção de IL-4 e IL-10, associada à presença de níveis elevados de anticorpos do isotipo IgG2a específicos à proteína e aos parasitos, foram também encontrados. O presente estudo mostrou que a proteína hipotética LiHyD, inicialmente identificada em L. infantum, pode ser utilizada como um antígeno para o sorodiagnóstico da LVC e, quando associada a um adjuvante Th1, pode também compor uma vacina para proteção contra as leishmanioses visceral e tegumentar.