Centrifugação com amortecimento durante a seleção espermática na produção in vitro de embriões bovinos

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Pavin, Cecilia Isabel Inês Urquiza Machado
• Orientador(a): Brum, Daniela dos Santos
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal do Pampa
• Departamento: Campus Uruguaiana
• Palavras-chave em Português: Sêmen; Sêmen animal; PIV; Seleção espermática; Gradiente descontínuo de Percoll
• Palavras-chave em Inglês: Semen; Animal semen; IVP; Sperm selection; Discontinuous Percoll gradients
• Link de acesso: http://dspace.unipampa.edu.br/jspui/handle/riu/498

Os métodos de seleção espermática são utilizados com o objetivo de isolar uma maior população de espermatozoides morfologicamente melhor, além de permitir a capacitação destes, incrementando a taxa de embriões produzidos in vitro. Entre os métodos de seleção, o mais utilizado comercialmente na produção in vitro (PIV) de embriões bovinos é o método de Gradiente Descontínuo de Percoll® (GDP). No entanto, apesar da praticidade desta técnica, a etapa de centrifugação é prejudicial, sendo responsável por danos estruturais as células espermáticas, bem como a diminuição da motilidade e da taxa de recuperação, interferindo assim, nas taxas de fecundação in vitro (FIV). Este estudo objetivou avaliar a centrifugação com amortecimento utilizando uma solução de iodixanol durante a seleção espermática para a PIV de embriões bovinos. No experimento I, o sêmen foi descongelado e dividido em quatro grupos, e os espermatozoides submetidos a separação espermática pelo método de GDP com ou sem a solução colóide; sendo o amortecimento testado na primeira (C1), segunda (C2) ou ambas centrifugações (C1-2). Em seguida, foram avaliadas a taxa de recuperação, a cinética espermática, e a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs). No experimento II foi avaliada a taxa de fecundação e a cinética de desenvolvimento embrionário dos grupos C e C1, que foram os tratamentos que demonstraram os melhores resultados para a cinética espermática, taxa de recuperação e análise bioquímica no primeiro experimento. Neste estudo, o grupo com amortecimento obteve um aumento na taxa de fecundação e clivagem, quando comparado ao grupo controle (60,5 vs 48,55 e 80,0 vs 64,7%, respectivamente). Com base nestes resultados foi possível concluir que o uso de 9 uma solução de amortecimento durante a etapa de centrifugação para a seleção espermática permitiu a preservação da cinética e da integridade da membrana dos espermatozoides, sem reduzir a taxa de recuperação. Adicionalmente, foi demonstrado pela primeira vez que o uso da centrifugação com amortecimento incrementa, não apenas a taxa de fecundação e clivagem, mas também o número de embriões que clivam mais cedo.