Desenvolvimento de novo método sorológico para o diagnóstico diferencial da infecção humana pelo HTLV-1/2 empregando plataforma única para pesquisa de anticorpos IgG1 por citometria de fluxo

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Paiva, Luciene Pimenta de Paiva
• Orientador(a): Martins Filho, Olindo Assis, Reis, Jordana Grazziela Alves Coelho dos
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/48362
• topic: HTLV-1/2; Diagnóstico diferencial; Citometria de Fluxo; HTLV-1/2; Differential diagnosis; Flow Cytometry

O HTLV (Human T-lymphotropic virus) é o primeiro retrovírus descoberto associado a doenças em humanos. Existem mais de 10 milhões de pessoas infectadas em todo o mundo, sendo o Brasil, globalmente, o país com o maior número absoluto de casos da infecção. Aproximadamente 95 a 98% dos indivíduos infectados pelo HTLV permanecem assintomáticos, no entanto, 2 a 5% dos infectados podem desenvolver manifestações clínicas graves. Enquanto a infecção pelo HTLV-1 pode se manifestar com doenças de alta gravidade, como a Mielopatia Associada ao HTLV ou Paraparesia Espástica Tropical (HAM/TSP), o HTLV-2 é associado predominantemente com quadros benignos e doença assintomática. Apesar da importância clínica de se distinguir a infecção pelo HTLV-1 e HTLV-2, existe uma atual escassez de métodos de tipagem capazes de distinguir anticorpos gerados para estes dois tipos virais. Desta forma, este trabalho teve como foco o desenvolvimento de um novo método sorológico, denominado FC-Duplex IgG1 (HTLV-1/2), baseado em um protocolo de marcação fluorescente diferencial, utilizando Alexa Flúor-647, de linhagens celulares infectadas pelo HTLV-1 (MT-2) e HTLV-2 (MoT) para análise seletiva simultânea empregando plataforma única por citometria de fluxo. Por meio do FC-Duplex IgG1 (HTLV-1/2) foi possível avaliar a reatividade de anticorpos IgG1 anti-HTLV-1/2 em amostras de soro de indivíduos infectados pelo HTLV-1/2 e doadores saudáveis com alta sensibilidade e especificidade no diagnóstico universal e diferencial da infecção. A metodologia desenvolvida apresentou alta estabilidade da marcação fluorescente diferencial e da antigenicidade das linhagens celulares MT-2 e MoT em diferentes condições (TA, 4ºC e -20ºC) e tempos (2, 6 e 12 meses) de armazenamento. Utilizando um algoritmo de decisão assincrônico, foi possível realizar o diagnóstico diferencial da infecção pelo HTLV-1/2 empregando a metodologia FC-Duplex IgG1 (HTLV-1/2). Por fim, a avaliação do desempenho de FC-Duplex IgG1 (HTLV-1/2) indicou potencial para o prognóstico da infecção pelo HTLV-1. A metodologia permitiu o depósito de patente, o que define o potencial inovador de FC-Duplex IgG1 (HTLV-1/2) no diagnóstico universal e diferencial da infecção pelo HTLV-1/2. De nosso conhecimento, esta é a primeira estratégia sorológica, além do Western Blot, capaz de segregar indivíduos infectados pelo HTLV-1 e HTLV-2, empregando plataforma única para pesquisa de anticorpos IgG1 por citometria de fluxo.