Composto ativador de procaspase-1 induz apoptose-like em Trypanosoma cruzi

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Castro, Emanuella de
• Orientador(a): Souza, Tatiana de Arruda Campos Brasil de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Fiocruz/ICC
• Link de acesso: https://arca.fiocruz.br/handle/icict/32852
• topic: Trypanosoma cruzi; Parasitology; Apoptosis; Parasitología; Parasitologia; Apoptose

A apoptose é um processo de morte celular extremamente regulado que requer interação de inúmeros fatores. São observadas alterações morfológicas características da morte celular por apoptose, geradas em consequência de uma cascata de eventos moleculares e bioquímicos específicos e geneticamente regulados. A via de apoptose é utilizada como alvo para tratamento de doenças como Leishmaniose, portanto, o estudo de proteínas que regulam essa via em tripanosomatídeos se mostra bastante relevante. Diversos estudos mostraram a ocorrência de apoptose em organismos unicelulares, incluindo o Trypanosoma cruzi, agente causador da doença de Chagas. Nesses organismos, as metacaspases (TcMCAs) parecem desempenhar um papel chave nesse processo, e foram identificadas duas metacaspases, a metacaspase-3 (TcMCA3) e a metacaspase-5 (TcMCA5). Esse trabalho forneceu dados a respeito da regulação de TcMCA3 através da interação com o composto ativador de procaspase-1 (PAC-1), um ativador de procaspase 3. A produção de TcMCA3 recombinante em Escherichia coli cepa Tuner (DE3) resultou na expressão e purificação de duas isoformas: TcMCA3 intacta (~50 kDa) e a enzima processada (~30 kDA). O ensaio de fluorimetria de varredura diferencial com a proteína recombinante e uma biblioteca de compostos que ativam apoptose em humanos identificou PAC-1 como um potencial ligante de TcMCA3. A interação de PAC-1 e TcMCA3 reduziu a viabilidade de epimastigotas de T. cruzi com um IC50 de 14,12 μM. PAC-1 causou perda no potencial mitocondrial e exposição de fosfatidilserina, características do processo apoptótico que foram identificados por citometria de fluxo. O tratamento em tripomastigotas metacíclicos não apresentou as mesmas características vistas em epimastigotas. Estes se mostraram mais resistentes ao tratamento, apresentando alteração no potencial de membrana mitocondrial, mas sem o rompimento da membrana celular ou exposição de fosfatidilserina. Análises de docking molecular mostram que a provável região da interação TcMCA3 e PAC-1 não é conservada em outros organismos. Além disso, ensaios de citotoxicidade com células de mamíferos (células 3T3) revelaram um IC50 maior que o encontrado para epimastigotas, o que indica que Pac-1 afeta o parasita T. cruzi em doses menores que em células de mamíferos. Esses dados compõem o artigo "Procaspase-activating compound-1 induces apoptosis in Trypanosoma cruzi, e são importantes para melhor compreensão da apoptose nesse organismo, e assim revelar um possível alvo para novos fármacos.