Avaliação histológica e de biocompatibilidade do pericárdio bovino após processo de descelularização branda para uso em biopróteses valvares

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Heuschkel, Marina Augusto
• Orientador(a): Stimamiglio, Marco Augusto
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Fiocruz/ICC
• Link de acesso: https://arca.fiocruz.br/handle/icict/32011
• topic: Bioprótese valvares; Descelularização; Pericárdio Bovino; Heart Diseases; Decellularization; Pericardium; Extracellular Matrix; Bioprosthesis; Cardiopatías; Pericardio; Matriz Extracelular; Bioprótesis; Cardiopatias; Pericárdio Bovino; Matriz Extracelular

Valvulopatias são doenças que afetam a funcionalidade das válvulas cardíacas e o tratamento cirúrgico é realizado por meio da utilização de substitutos valvares. Dentre estes, as biopróteses convencionais apresentam limitações relacionadas a ruptura e a calcificação. Nesse contexto, visando o desenvolvimento de biopróteses valvares que superem estas limitações, o estudo busca avaliar a integridade estrutural e a biocompatibilidade do pericárdio bovino (PB) após processo de descelularização branda com solução de dodecil sulfato de sódio (SDS) 0,1%. A eficácia da descelularização dos PBs foi avaliada por meio da extração do DNA genômico seguido por quantificação e eletroforese em gel de agarose, coloração de Hematoxilina/Eosina (H&E) e marcação nuclear com 4',6-diamino-2-fenilindol (DAPI). Ensaios de imunofluorescência foram realizados para a visualização das proteínas da matriz extracelular (MEC) e do xenoantígeno imunogênico galactose-alfa-1,3-galactose (alfa-gal). A biocompatibilidade do tecido foi avaliada através do seu cultivo com células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo (aCTMs) humano. Assim, o processo de descelularização tecidual promoveu redução média de 77% da quantidade de DNA das amostras. Núcleos celulares não foram visíveis nas colorações de H&E e DAPI, apesar da presença de bandas de DNA maiores que 200 pb no gel de agarose. O conteúdo e a disposição dos colágenos I, III, IV, decorina e elastina não foram alterados com a descelularização. Porém, laminina e lumicam apresentaram marcação reduzida no tecido descelularizado, assim como a proteína de citoesqueleto vimentina. Foi observado por microscopia eletrônica de varredura um afrouxamento das fibras da face fibrosa do tecido descelularizado em comparação ao tecido fresco. Além disso, os PBs descelularizados apresentaram-se negativos para o antígeno alfa-gal e não-citotóxicos in vitro. Por fim, a análise de biocompatibilidade demonstrou a aderência das aCTMs ao tecido descelularizado após 24 h em cultivo e um arcabouço tecidual repopulado após 7 dias em cultura. Em conjunto estas características indicam que a descelularização branda do PB com solução de SDS 0,1% permite a obtenção de um arcabouço tecidual adequado para o repovoamento celular e para o desenvolvimento de biopróteses valvares.