Caracterização molecular e funcional da enzima urease (URE) de Sporothrix brasiliensis

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Oliveira, Luã Cardoso de
• Orientador(a): Oliveira, Rosely Maria Zancope, Alves, Carlos Roberto
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://arca.fiocruz.br/handle/icict/60677
• topic: Sporothrix brasiliensis; Urease; Caracterização Bioquímica; Sporothrix brasiliensis; Urease; Biochemical Characterization; Sporothrix; Urease; Expressão Gênica; Bioquímica

No Rio de Janeiro observa-se uma hiperendemia de esporotricose, causada principalmente por Sporothrix brasiliensis. Espécies clínicas de S. brasiliensis, produzem urease, porém pouco se avançou no conhecimento desta. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a urease, verificar a expressão de seu gene e começar a entender seu possível papel na virulência. Foram utilizadas 2 cepas de S. brasiliensis, uma delas considerada produtora de urease e outra considerada não produtora de urease. Fenotipicamente, foi observado que apenas a cepa considerada urease positiva foi capaz de crescer em meio de cultivo cujo a ureia era a única fonte de nitrogênio, e quando esta foi cultivada em meio com inibidor tioureia apresentou pouco crescimento. Após, o extrato proteico foi submetido a ressonância plasmômica de superfície (SPR) e western blot para caracterizar a enzima bioquimicamente. A expressão gênica da urease foi verificada por qPCR e a comparação, in silico, entre a urease de S. brasiliensis, a de outros 20 fungos e de Canavalia ensiformis. A técnica de western blot não demonstrou reatividade na cepa negativa, já na SPR esta foi evidenciada nas duas cepas. A partir disto, foram realizadas reações de qPCR para verificar a expressão gênica do gene codificador da urease nas duas cepas, e em ambas o RNA mensageiro para urease está presente. Foi comparada, através de ferramentas de bioinformática, as sequencias de urease de 21 fungos e de C. ensiformis, e a urease se mostrou uma enzima bem conservada entre as espécies analisadas, e parece ser, corroborando com os achados in vitro uma enzima que se localiza no citoplasma celular. Os achados nesta tese, indicam que a urease provavelmente é um gene constitutivo neste modelo fúngico, e muito importante para o crescimento celular do S. brasiliensis, pois em condições inibitórias da enzima o fungo foi incapaz de crescer normalmente. Esses dados, juntamente com a demonstração da alta preservação desta enzima nos fungos, sugerem que a urease é importante para a fisiologia do S. brasiliensis em parasitismo