Variabilidade entre isolados de cowpea severe mosaic virus por meio de caracterização biológica, sorológica e molecular.

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: SILVA, A. K. F.
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Metodologia; Diagnose; Sequenciamento; Vigna Unguiculata; Cowpeas
• Link de acesso: http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/handle/doc/1102497

O feijão caupi Vigna unguiculata subsp. unguiculata constitui um alimento básico das populações rurais e urbanas das regiões Norte e Nordeste, possui grande importância como gerador de emprego e renda, sendo cultivado por pequenos e médios produtores. O Brasil é o maior produtor de feijão [feijão comum (Phaseolus vulgaris) e feijão caupi] com produção de 2,5 mil toneladas, na safra de 2015/16, sendo os estados do Paraná e Minas Gerais os maiores produtores de feijão comum, ficando o estado do Ceará na nona posição. Vários fatores afetam a cultura do feijão caupi, influenciando na qualidade e na quantidade produzida, destacando as viroses como responsáveis por grandes perdas na cultura. Várias espécies de vírus podem infectar naturalmente o feijão caupi, destacando-se o Cowpea severe mosaic virus (CPSMV). O objetivo desta pesquisa foi estudar a variabilidade genética de isolados de CPSMV, de diferentes estados da Região Nordeste, por meio da caracterização biológica, sorológica e molecular. Os experimentos realizados foram conduzidos em casa de vegetação e no Laboratório de Virologia Vegetal da Universidade Federal do Ceará. O isolado de CPSMV-MC foi purificado a partir de plantas de feijão caupi cultivar Macaibo, obtendo uma preparação viral com concentração de 64,83 mg de vírus por Kg de tecido infectado e título do antissoro de 1:1.024, em teste de Dupla Difusão em Ágar (DDA). No estudo biológico, por gama parcial de plantas hospedeiras, mostrou diferença sintomatológica entre o isolado CPSMV-MC e os demais. O resultado do estudo sorológico mostrou que o isolado CPSMV- MC pode ser sorologicamente distinto, quando utilizado antissoro produzido a partir deste isolado. As análises eletroforética revelaram bandas referentes ao peso da proteína capsidial, formada por duas proteínas estruturais de aproximadamente 22,5 kDa e de 39 kDa. Estudo de comparação entre PTA-ELISA e IP-PTA-ELISA, variações da técnica de ELISA, mostrou que o IP-ELISA foi eficiente e confiável para a detecção do CPSMV, contornando alguns problemas de vírus do gênero Comovirus que não aderem adequadamente aos fundos dos orifícios das placas de ELISA. No estudo molecular, os primers desenhados para o genoma parcial de regiões dos RNA1 e RNA2 podem ser utilizados tanto para detecção quanto para sequenciamento do vírus. As análises filogenéticas das sequências dos isolados de CPSMV, utilizando primers para a região do RNA1, revelaram diferença entre o isolado CPSMV-MC e os demais, enquadrando os mesmos em dois grupos. Um grupo que causam sintomas severos, agregando sete isolados de CPSMV e o outro grupo com apenas um isolado, que causa sintoma leve (CPSMV-MC) em feijão caupi. O estudo de interação entre vírus que infecta o feijão caupi ?Setentão? mostrou forte sinergismo entre CPSMV, Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV) e Cucumber mosaic virus (CMV), levando em alguns casos morte da planta, principalmente, quando da interação desses três vírus, sendo que dois desse isolados apresentaram sintomas severos nas plantas, quando em infecção simples. Estudos desta natureza, envolvendo aspectos relacionados ao patógeno e a planta produzem informações importantes aos programas que visam o desenvolvimento de cultivares resistentes a vírus.