Sistema modelo para redução dos níveis de Zearalenona por ação enzimática
| Ano de defesa: | 2016 |
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Garcia, Sabrina de OliveiraBuffon, Jaqueline Garda2025-03-31T19:03:33Z2025-03-31T19:03:33Z2016GARCIA, Sabrina de Oliveira. Sistema modelo para redução dos níveis de Zearalenona por ação enzimática. 2016. 97 f. Dissertação (Mestrado em Engenharia e Ciência de Alimentos) - Programa de Pós-graduação em Engenharia e Ciência de Alimentos, Escola de Química e Alimentos, Universidade Federal do Rio Grande, Rio Grande, 2016.https://repositorio.furg.br/handle/123456789/12504Dissertação (Mestrado)Estudos têm enfatizado que a ação de enzimas apresenta resultados satisfatórios quanto a redução dos efeitos tóxicos das micotoxinas e sua aplicação apresenta como vantagem promover alterações mínimas nas propriedades funcionais e nutricionais dos alimentos quando comparado aos métodos químicos. A Zearalenona (ZON) é uma micotoxina produzida principalmente por fungos da espécie Fusarium graminearum, quando em condições de estresse, apresentando como características ação estrogênica. Contamina diversas matérias- primas destinadas à alimentação humana e animal, representando riscos à saúde. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a ação da enzima peroxidase (PO) comercial e obtida de farelo de arroz (FA) e de farelo de soja (FS) na redução dos níveis de ZON. A PO foi extraída com tampão fosfato 10 mM pH 5,0 e 4,7 para FS e FA, respectivamente, sob agitação orbital de 100 rpm durante 60 min. Como estratégia de purificação enzimática foi utilizada a técnica de partição trifásica. ZON e ß-Zearalenol (B-ZOL, metabólito de degradação da ZON) foram extraídos do meio reacional enzimático por partição líquido-líquido e quantificados em cromatógrafo líquido de alta eficiência acoplado a detector de fluorescência (CLAE-FL). Para otimização do meio reacional para a avaliar a cinética de redução foram realizados testes em diferentes meios (tamponante, aquoso e etanólico) visando a obtenção da melhor atividade enzimática em conjunto com a maior recuperação de ZON. A estabilidade da micotoxina foi avaliada durante 7 dias de incubação no meio reacional ótimo. A afinidade entre as enzimas e a ZON foi verificada segundo os parâmetros de KM e Vmáx. A cinética de redução da concentração de ZON (1 ug mL-1) foi realizada utilizando as enzimas PO comercial (0,6 U mL-1) e PO obtida de FA e FS (0,6 e 6 U mL-1) durante 24 h. A confirmação da ação da PO na redução dos níveis de ZON foi avaliada através da caracterização da estrutura química da micotoxina em espectroscopia na região do Infravermelho com Transformada de Fourier (FTIR) e a identificação do íon molecular da ZON e ß-ZOL em cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas tandem espectrometria de massas (LC-MS/MS). A aplicação da enzima PO comercial, visando a redução da concentração de ZON, foi realizada em amostras de cerveja tipo Pilsen. A recuperação e o fator de purificação para a PO obtida de FA e de FS foram de 41 e 94% e 0,7 e 4,4, respectivamente. Um método sensível, exato e preciso foi validado para CLAE-FL. O meio reacional aquoso e tamponante foram definidos para ação da PO obtida FA e de FS, respectivamente, sendo que a ZON permanece estável em tais meios por 24 h. Os valores de KM e Vmax para a PO comercial e PO obtida de FA foram de 39,61 uM e 0,170 uM min"1 e 8,90 uM e 0,011 uM min"1, respectivamente. A PO comercial reduziu a concentração de ZON em 69,9% em 24 h, enquanto que a PO obtida de FA e de FS apresentaram uma redução de ZON de 47,4 e 30,6%, respectivamente. As análises de FTIR e LC-ESI-MS/MS confirmaram a acao oxidorredutiva da PO comercial. A atuaçao da PO comercial em amostras de cerveja reduziu a concentração de ZON em 5,8%. Desta forma a redução dos níveis de ZON poderá possibilitar a aplicação da PO em processos industriais, visando à utilização de grãos e cereais contaminados na produção de alimentos.Studies have emphasized that the enzymatic action shows satisfactory results with respect to the reduction of the toxic effects of mycotoxins, and his application has the advantage of promoting minimum changes in the functional and nutritional properties in food, when compared to chemical methods. Zearalenone (ZON) is a mycotoxin produced mainly by the specie Fusarium graminearum, when in stress conditions, with features such as estrogenic action. Contaminates various raw materials for the food and feed, representing health risks. The aim of this study was to evaluate the reduction of ZON levels by the action of commercial peroxidase (PO) and obtained from rice bran (RB) and soybean meal (SM).The PO was extracted with phosphate buffer 10mM pH 5.0 and 4.7 for RB and SM, respectively, under orbital agitation of 100 rpm for 60 min. The technique of three-phase partition was used as enzymatic purification strategy. ZON and ß-zearalenol (ß-ZOL, ZON degradation metabolite) were extracted from the enzymatic reaction medium by liquid-liquid partition and quantified in high-performance liquid chromatograph with fluorescence detector (HPLC-FL). To optimization of the reaction medium to evaluate the reduction kinetics tests were performed on various mediums (buffering aqueous and ethanolic) in order to obtain the best enzyme activity in conjunction with the greatest recovery of ZON. The stability of the mycotoxin was evaluated for 7 days of incubation in medium optimal reaction. The affinity between enzymes and ZON was verified according to the parameters Km and Vmax. The reduction kinetics of the ZON concentration (1ug mL-1) was performed using commercial enzymes PO (0.6 U mL-1) and PO obtained of FA and FS (0.6 and 6 U mL-1) for 24 h. The confirmation of PO action in reducing ZON levels was assessed using the characterization of the chemical structure of mycotoxin in spectrometry of the infrared Fourier transform infrared spectrometer (FTIR) and confirmation of ZON and B-ZOL molecular ion's by liquid chromatography coupled to a source of electrospray ionization coupled to tandem mass spectrometry mass spectrometry (LC-ESI- MS/MS). The application of commercial PO enzyme, in order to concentration reduce of ZON was held in Pilsen beer samples. The recovery and purification factor for PO obtained for RB and SM were 41 and 94% and 0.7 and 4.4, respectively. A sensitive, accurate and precise method has been validated for HPLC-FL. The reaction medium aqueous and buffering were defined for PO action obtained RB and SM, respectively, whereby ZON remains stable in such media for 24 h. The KM and Vmax values for commercial PO and PO obtained from RB were 39.61 uM and 0.170 uM min"1 and 8.90 uM and 0.011 uM min"1, respectively. The commercial PO reduced ZON concentration at 69.9% in 24 h, while the PO obtained from RB and SM showed a reduction of ZON of 47.4 e 30.6%, respectively. The FTIR and LC-ESI-MS/MS analysis confirmed the oxidoreduction action of commercial PO. The performance of commercial PO in beer samples reduces the concentration of ZON at 5.8%. In this way, the reduction levels of ZON enables the application of PO in industrial processes to the use of contaminated grains and cereals in food production.porMicotoxinaPeroxidaseFarelo de arrozFarelo de sojaCinética enzimáticaMycotoxinRice branSoybean mealKinetics enzymaticSistema modelo para redução dos níveis de Zearalenona por ação enzimáticaModel system for zearalenone levels reduction by enzymatic actioninfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FURG (RI FURG)instname:Universidade Federal do Rio Grande (FURG)instacron:FURGORIGINALSabrina de Oliveira Garcia.pdfSabrina de Oliveira Garcia.pdfapplication/pdf1525079https://repositorio.furg.br/bitstreams/454507b4-95af-4273-b905-577476dadc57/downloadaa361dcad2ee368a906b125751e4c561MD51trueAnonymousREADLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81748https://repositorio.furg.br/bitstreams/1d2a1612-cac9-4ce3-bdb4-832944163ce7/download8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD52falseAnonymousREADTEXTSabrina de Oliveira Garcia.pdf.txtSabrina de Oliveira Garcia.pdf.txtExtracted texttext/plain103112https://repositorio.furg.br/bitstreams/26374b31-3ab8-42ac-a5b6-d47d177e0960/downloadb397f3f6b1d1a9cf43ad44654f0cb7b4MD53falseAnonymousREADTHUMBNAILSabrina de Oliveira Garcia.pdf.jpgSabrina de Oliveira Garcia.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg2830https://repositorio.furg.br/bitstreams/71d11eee-59a9-4571-8275-d5fefcc9a4a3/download3e3bc1d55a63bcaee5ee978ed201db45MD54falseAnonymousREAD123456789/125042025-12-10 00:53:00.893open.accessoai:repositorio.furg.br:123456789/12504https://repositorio.furg.brRepositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.furg.br/oai/request || http://200.19.254.174/oai/requestrepositorio@furg.br||sib.bdtd@furg.bropendoar:2025-12-10T03:53Repositório Institucional da FURG (RI FURG) - Universidade Federal do Rio Grande (FURG)falseTk9URTogUExBQ0UgWU9VUiBPV04gTElDRU5TRSBIRVJFClRoaXMgc2FtcGxlIGxpY2Vuc2UgaXMgcHJvdmlkZWQgZm9yIGluZm9ybWF0aW9uYWwgcHVycG9zZXMgb25seS4KCk5PTi1FWENMVVNJVkUgRElTVFJJQlVUSU9OIExJQ0VOU0UKCkJ5IHNpZ25pbmcgYW5kIHN1Ym1pdHRpbmcgdGhpcyBsaWNlbnNlLCB5b3UgKHRoZSBhdXRob3Iocykgb3IgY29weXJpZ2h0Cm93bmVyKSBncmFudHMgdG8gRFNwYWNlIFVuaXZlcnNpdHkgKERTVSkgdGhlIG5vbi1leGNsdXNpdmUgcmlnaHQgdG8gcmVwcm9kdWNlLAp0cmFuc2xhdGUgKGFzIGRlZmluZWQgYmVsb3cpLCBhbmQvb3IgZGlzdHJpYnV0ZSB5b3VyIHN1Ym1pc3Npb24gKGluY2x1ZGluZwp0aGUgYWJzdHJhY3QpIHdvcmxkd2lkZSBpbiBwcmludCBhbmQgZWxlY3Ryb25pYyBmb3JtYXQgYW5kIGluIGFueSBtZWRpdW0sCmluY2x1ZGluZyBidXQgbm90IGxpbWl0ZWQgdG8gYXVkaW8gb3IgdmlkZW8uCgpZb3UgYWdyZWUgdGhhdCBEU1UgbWF5LCB3aXRob3V0IGNoYW5naW5nIHRoZSBjb250ZW50LCB0cmFuc2xhdGUgdGhlCnN1Ym1pc3Npb24gdG8gYW55IG1lZGl1bSBvciBmb3JtYXQgZm9yIHRoZSBwdXJwb3NlIG9mIHByZXNlcnZhdGlvbi4KCllvdSBhbHNvIGFncmVlIHRoYXQgRFNVIG1heSBrZWVwIG1vcmUgdGhhbiBvbmUgY29weSBvZiB0aGlzIHN1Ym1pc3Npb24gZm9yCnB1cnBvc2VzIG9mIHNlY3VyaXR5LCBiYWNrLXVwIGFuZCBwcmVzZXJ2YXRpb24uCgpZb3UgcmVwcmVzZW50IHRoYXQgdGhlIHN1Ym1pc3Npb24gaXMgeW91ciBvcmlnaW5hbCB3b3JrLCBhbmQgdGhhdCB5b3UgaGF2ZQp0aGUgcmlnaHQgdG8gZ3JhbnQgdGhlIHJpZ2h0cyBjb250YWluZWQgaW4gdGhpcyBsaWNlbnNlLiBZb3UgYWxzbyByZXByZXNlbnQKdGhhdCB5b3VyIHN1Ym1pc3Npb24gZG9lcyBub3QsIHRvIHRoZSBiZXN0IG9mIHlvdXIga25vd2xlZGdlLCBpbmZyaW5nZSB1cG9uCmFueW9uZSdzIGNvcHlyaWdodC4KCklmIHRoZSBzdWJtaXNzaW9uIGNvbnRhaW5zIG1hdGVyaWFsIGZvciB3aGljaCB5b3UgZG8gbm90IGhvbGQgY29weXJpZ2h0LAp5b3UgcmVwcmVzZW50IHRoYXQgeW91IGhhdmUgb2J0YWluZWQgdGhlIHVucmVzdHJpY3RlZCBwZXJtaXNzaW9uIG9mIHRoZQpjb3B5cmlnaHQgb3duZXIgdG8gZ3JhbnQgRFNVIHRoZSByaWdodHMgcmVxdWlyZWQgYnkgdGhpcyBsaWNlbnNlLCBhbmQgdGhhdApzdWNoIHRoaXJkLXBhcnR5IG93bmVkIG1hdGVyaWFsIGlzIGNsZWFybHkgaWRlbnRpZmllZCBhbmQgYWNrbm93bGVkZ2VkCndpdGhpbiB0aGUgdGV4dCBvciBjb250ZW50IG9mIHRoZSBzdWJtaXNzaW9uLgoKSUYgVEhFIFNVQk1JU1NJT04gSVMgQkFTRUQgVVBPTiBXT1JLIFRIQVQgSEFTIEJFRU4gU1BPTlNPUkVEIE9SIFNVUFBPUlRFRApCWSBBTiBBR0VOQ1kgT1IgT1JHQU5JWkFUSU9OIE9USEVSIFRIQU4gRFNVLCBZT1UgUkVQUkVTRU5UIFRIQVQgWU9VIEhBVkUKRlVMRklMTEVEIEFOWSBSSUdIVCBPRiBSRVZJRVcgT1IgT1RIRVIgT0JMSUdBVElPTlMgUkVRVUlSRUQgQlkgU1VDSApDT05UUkFDVCBPUiBBR1JFRU1FTlQuCgpEU1Ugd2lsbCBjbGVhcmx5IGlkZW50aWZ5IHlvdXIgbmFtZShzKSBhcyB0aGUgYXV0aG9yKHMpIG9yIG93bmVyKHMpIG9mIHRoZQpzdWJtaXNzaW9uLCBhbmQgd2lsbCBub3QgbWFrZSBhbnkgYWx0ZXJhdGlvbiwgb3RoZXIgdGhhbiBhcyBhbGxvd2VkIGJ5IHRoaXMKbGljZW5zZSwgdG8geW91ciBzdWJtaXNzaW9uLgo= |
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