A enzima histidinol desidrogenase de mycobacterium tuberculosis como alvo para o desenvolvimento de drogas : caracterização bioquímica

• Ano de defesa: 2011
• Autor(a) principal: Nunes, José Eduardo Sacconi
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul; Escola de Ciências; Brasil; PUCRS; Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular
• Palavras-chave em Português: Mycobacterium Tuberculosis; CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL
• Link de acesso: http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/8231

Em 2009 a tuberculose (TB) foi responsável por 1,3 milhões de mortes no mundo inteiro. A incidência de casos chegou ao patamar de 9,4 milhões e as estimativas da Organização Mundial da Saúde (OMS) indicam que aproximadamente 1/3 da população mundial está infectada pelo Mycobacterium tuberculosis, principal agente causador da doença. A falta de novas drogas no mercado, o tratamento longo e com efeitos colaterais (levando ao abandono por parte dos pacientes) e os quadros de co-infecção com HIV tem colaborado para o surgimento de novas cepas resistentes as drogas atualmente em uso (MDR-TB e XDR-TB). Fica claro, portanto, que o desenvolvimento de novas drogas para o combate da TB é necessário e fundamental para que se tenha sucesso na erradicação desta doença. A via de biossíntese de histidina aparece nesse contexto oferecendo alvos atrativos, visto que está presente em organismos procarióticos, em organismos eucarióticos inferiores e em plantas, mas ausente em animais. A última enzima pertencente à via é chamada de Histidinol Desidrogenase e é responsável pela conversão de L-Histidinol em L-Histidina. Sua essencialidade para a viabilidade do bacilo foi comprovada através de nocaute gênico, confirmando sua potencialidade para o desenvolvimento de compostos inibidores de sua atividade. Neste trabalho, um protocolo depurificação foi desenvolvido, produzindo a enzima na forma homogênea em quantidades suficientes para realizar a caracterização bioquímica da mesma. A enzima necessita de um íon metálico divalente no sítio para catalisar a reação. Suas constantes cinéticas foram determinadas, assim como o mecanismo, os perfis de pH, e a interação com os substratos e produtos através de calorimetria de titulação isotérmica. Um modelo tridimensional da sua estrutura foi construído por homologia de sequência, permitindo uma análise da interação dos substratos e do metal no sítio ativo da enzima. Os resultados obtidos permitirão o desenho racional de moléculas que atuem como inibidores.