Análise da expressão dos receptores purinérgicos P2X no câncer de bexiga

• Ano de defesa: 2014
• Autor(a) principal: Carvalho, Daniela de Oliveira
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul; Faculdade de Medicina; BR; PUCRS; Programa de Pós-Graduação em Medicina e Ciências da Saúde
• Palavras-chave em Português: MEDICINA; FARMACOLOGIA MOLECULAR; NEOPLASIAS DA BEXIGA URINÁRIA; BIOQUÍMICA; BEXIGA - DOENÇAS; CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::MEDICINA
• Link de acesso: http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/1776

O sistema purinérgico pode induzir a proliferação, diferenciação e morte em células tumorais. Diferentes receptores purinérgicos P2, estão envolvidos na inibição do crescimento tumoral. Embora os mecanismos não sejam completamente conhecidos, estes receptores podem representar alvos terapêuticos interessantes no tumor de bexiga. As linhagens celulares derivadas de tumor de bexiga humano RT4 e T24 têm sido usadas como modelo de baixa e alta malignidade de tumor, respectivamente. Estudos realizados pelo nosso grupo de pesquisa têm demonstrado o envolvimento do sistema purinérgico no tumor de bexiga. A quercetina aumenta a hidrólise do ADP e inibe a ecto - 5' - nucleotidase / CD73, exercendo um efeito anti - proliferativo sobre as células T24. Também demonstramos que as linhagens de células T24 expressam enzimas CD39L4 e ecto - 5' - nucleotidase / CD73, e têm baixa atividade hidrolítica de ATPase e ADPásica com uma elevada atividade AMPásica. Estes dados sugerem o envolvimento das enzimas e receptores purinérgicos na progressão do tumor de bexiga, bem como em outros tipos de tumor. O objetivo do estudo é caracterizar a expressão dos receptores purinérgicos P2X (1-7) em biópsias de câncer de bexiga e linhagens celulares de tumor de bexiga humano, relacionado com o perfil de genes inflamatórios mais expressos nestas amostras. Metodologia: As linhagens celulares de bexiga humanas RT4 e T24 foram obtidas a partir da ATCC. As células foram cultivadas em meio RPMI e DMEN, respectivamente, suplementado com 10 % de soro fetal bovino (SFB), sob condições ideais de cultivo. Para confirmar a relevância dos receptores P2X (1-7) no tumor de bexiga, avaliou-se a expressão em biópsias humanas. Para isso, após aprovação pelo comitê de ética local, amostras de tecidos normais e tumorais de bexiga foram obtidas dos mesmos pacientes, submetidos à ressecção cirúrgica no Hospital São Lucas / PUCRS. O RNA total dos tecidos foi isolado utilizando kit TRIzol . O nível de mRNA foi analisado utilizando análise RT - PCR . Resultados: O PCR em tempo real revelou que a expressão de mRNA de receptores purinérgicos P2X, particularmente P2X4R foi significativamente up- regulada em ambas linhagens RT4 e T24. Dados a partir de biópsias de tumores de bexiga humanos que comparam os resultados de expressão do tecido tumoral em relação ao tecido normal de bexiga, demonstrou que os receptores de P2X6 e P2X7 estão superexpressos em tecidos tumorais. Doze genes relacionados com a inflamação, CCL2, CCR2, TNF-α, MAPK3, IL-1β, IL-6, ADORA1, CD200, CD4, CHRNA4, EDNRA e ITGB2 foram significativamente superexpressos em células T24 derivadas de tumor de grau III quando comparadas com as células RT4 derivadas de tumor de grau I. Nossos resultados indicam que os genes superexpressos de inflamação podem desempenhar um papel importante na regulação do tumor de bexiga urinária. Conclusão: Podemos concluir que purinoreceptores P2X e os genes inflamatórios são diferencialmente distribuídos entre bexiga normal e tumoral, o que pode contribuir para as diferentes características destes diferentes tipos de tumores.