Caracteriza????o molecular de doen??as raras do esqueleto

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: Marques, Felipe Albuquerque
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Cat??lica de Bras??lia; Escola de Sa??de e Medicina; Brasil; UCB; Programa Strictu Sensu em Ci??ncias Gen??micas e Biotecnologia
• Palavras-chave em Português: Biotecnologia; Whole Exome Sequencing; Chromossomal Microarray Analysis; Craniossinostose; S??ndrome de FATCO; S??ndrome de Catel-Manzke-like; S??ndrome de Nager; S??ndrome de Rodriguez; CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
• Link de acesso: https://bdtd.ucb.br:8443/jspui/handle/tede/2085

As doen??as gen??ticas do esqueleto s??o anomalias que envolvem a g??nese do sistema esquel??tico, causadas por altera????es em genes que atuam principalmente na cartilagem e/ou no n??cleo de crescimento. Na classifica????o atual h?? 456 doen??as do esqueleto categorizadas em 40 grupos. Destes, 360 patologias esquel??ticas est??o associadas a defeitos em 336 genes (portanto, existem 90 displasias esquel??ticas sem causa definida). O surgimento de t??cnicas de alta resolu????o de an??lise gen??mica tem permitido que cada vez mais doen??as gen??ticas, incluindo as doen??as gen??ticas do esqueleto, possam ter suas bases moleculares elucidadas. Esta pesquisa teve como objetivo a identifica????o e caracteriza????o de genes e regi??es do genoma humano associado a doen??as gen??ticas raras do esqueleto. Para isso, implantou-se um pipeline envolvendo experimentos e an??lise de dados. Esta tese investigou varia????es de nucleot??deo ??nico (SNVs) pelo uso Whole Exome Sequencing (WES) e varia????es estruturais submicrosc??picas, pelo uso Chromossomal Microarray Analysis (CMA). Al??m disso, fez-se uso de Sequenciamento de Sanger, Fluorescence in situ Hybridization, testes funcionais in vitro (cultura celular, qRT-PCR, Western Blot, Imunofluoresc??ncia e Transcritoma), Imunohistoqu??ca e histoqu??mica. Foram selecionados 14 pacientes com doen??as raras do esqueleto (Craniossinostose, s??ndrome FATCO, s??ndrome Catel-Manzke-like, s??ndrome de Nager e s??ndrome Rodriguez). Craniossinostose: dos quatro pacientes, dois foram diagnosticados com muta????o em FGFR3 e outro com uma transloca????o envolvendo os cromossomos 17q e 20q. S??ndrome de FATCO: n??o foi poss??vel identificar as bases moleculares da doen??a. ???Catel-Manzke-Like???: inicialmente diagnosticado com Sindrome de Catel-Manzke, o paciente teve uma muta????o detectada em EXT2, sendo reclassificado como uma nova s??ndrome (S??ndrome Convuls??o-Escoliose-Microcefalia). S??ndromes de Nager e Rodriguez: foram diagnosticado muta????es no gene SF3B4 em dois dos quatro pacientes. Nestes mesmos pacientes foram realizados qTR-PCR, Western Blot e Imunofluoresc??ncia que juntos sugeriram que estas patologias sejam causadas pela haploinsufici??ncia do SF3B4. A imunohistoqu??mica e histoqu??mica mostraram a express??o de SF3B4 na placa de crescimento e desorganiza????o de condr??citos hipertr??ficos, respectivamente. O transcritoma de um dos pacientes, com muta????o em SF3B4, evidenciou 12 genes ligados a esqueletog??nese com express??o diminu??da no tecido cartilaginoso. A combina????o de t??cnicas seja citogen??tica cl??ssica, citogen??tica molecular, sequenciamento, bem como an??lises in vitro se mostraram eficientes para se alcan??ar o diagn??stico. Embora houvesse um cerne investigativo em comum a todas as doen??as, as investiga????es foram personalizadas para cada caso, visando maior efici??ncia na detec????o das bases moleculares e otimiza????o dos custos da investiga????o molecular.