Purificação e Caracterização de uma esterase específica da fase larval em duas espécies de Drosophila do grupo repleta

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2012
Autor(a) principal: LOPES, Vanessa Falchetti
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
DROSOPHILA - FASE LARVAL
ESPECIE
ESTERASE LARVAL
EST-4
Link de acesso: https://biblioteca.sophia.com.br/terminalri/9566/acervo/detalhe/154897
Resumo: (Mestrado em Biologia Evolutiva) - Programa de Pós-Graduação em Biologia Evolutiva, Universidade Estadual do Centro-Oeste
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spelling Purificação e Caracterização de uma esterase específica da fase larval em duas espécies de Drosophila do grupo repletanão constaDROSOPHILA - FASE LARVALESPECIEESTERASE LARVALEST-4(Mestrado em Biologia Evolutiva) - Programa de Pós-Graduação em Biologia Evolutiva, Universidade Estadual do Centro-OesteUm grupo de enzimas bioquimicamente importante em insetos é o das esterases. Embora estas tenham sido extensivamente estudadas, ainda não está esclarecido o papel fisiológico da maioria delas. Neste trabalho foi feito um estudo de purificação e caracterização bioquímica da EST-4 (esterase larval) de duas espécies do grupo Drosophila repleta, Drosophila mulleri e Drosophila arizonae, com intuito de estabelecer parâmetros comparativos entre estas enzimas nestas espécies, a fim de verificar se há padrões bioquímicos que permitam uma diferenciação funcional das enzimas nas mesmas. Para tanto a EST-4, purificada através de cromatografias de exclusão de massa molar e troca iônica, foi submetida a ensaios bioquímicos, nos quais revelaram que em D. mulleri esta enzima mostrou atividade ótima na temperatura de 40 a 45°C e pH 7,5, mantendo maior estabilidade em pH alcalino, na faixa de pH 8,0-10. Foi classificada como serino esterase, uma vez que sua atividade foi inibida na presença de PMSF. Com relação ao estudo sobre efeito de íons metálicos, notou-se que nenhum íon modulou negativamente a EST-4, e o ferro foi o que maior exerceu efeito modulador positivo na atividade enzimática. O mesmo procedimento foi adotado para a EST-4 de D. arizonae, sendo que a mesma mostrou atividade enzimática ótima em temperatura 40°C e pH 8,0, mantendo maior estabilidade em pH ácido, na faixa de pH 5,5-6,5, e também pode ser classificada como serino esterase. Com relação ao ensaio de íons metálicos, o Fe+2 teve efeito contrário ao encontrado em D. mulleri, ou seja, atuou como modulador negativo. O Al+3 inibiu praticamente 100% a atividade enzimática e os íons Na+ e Cu+2 tiveram efeito modulador positivo. Foram realizados estudos cinéticos investigando a influência do substrato Ï -nitrofenil acetato na atividade enzimática, e apesar da EST-4 de D. mulleri apresentar maior afinidade pelo substrato citado, a EST-4 de D. arizonae demonstrou maior Vmax e eficiência catalítica em condições ideais de reação. Em suma, podemos inferir, com base nos dados da caracterização e cinética, que a EST-4 de D. mulleri e D. arizonae apresentam diferenciação funcional e bioquímica, uma vez que apresentaram propriedades distintas frente ao substrato utilizado, além de diferenças pontuais com relação aos ensaios de caracterização.Esterases form a group of biochemically important enzymes in insects. Although they have been extensively studied, it is still unclear the physiological role of most of them. In this work, the purification and biochemical characterization of EST-4 (larval esterase) from two species of the Drosophila repleta group, Drosophila mulleri and Drosophila arizonae, was performed in order to establish comparative parameters between these enzymes in these species and to check for biochemical patterns that allow a functional differentiation of enzymes in these species. Both EST-4 were purified by molecular weight exclusion and ion exchange chromatographies and were biochemically analyzed, which revealed that, in D. mulleri, this enzyme has optimal activity at temperatures from 40 to 45°C an d pH 7.5, maintaining stability in alkaline pH in the range of pH 8.0 to 10. In this species it was classified as serine esterase, since its activity was inhibited in the presence of PMSF. The effect of metal ions revealed that no ion negatively modulated EST-4, and that iron had the most positive modulating effect exerted on this enzyme activity. For the EST-4 of D. arizonae, and enzyme activity showed the same optimum temperature (40°C) and pH (8.0), maintainin g stability in acidic pH in the pH range from 5.5 to 6.5 and was also classified as a serine esterase. The metal ions test demonstrated that Fe+2 had the opposite effect that was found in this enzyme of D. mulleri, serving as a negative modulator. The Al+3 inhibited the enzyme activity almost 100% and Na+ and Cu+2 had a positive modulation effect. Kinetic studies were performed investigating the influence of substrate Ï -nitrophenyl acetate in enzyme activity, and despite D. mulleri`s EST-4 had a higher affinity for this substrate, D. arizonae`s showed higher Vmax and catalytic efficiency in optimal conditions of reaction. Therefore, it can inferred, based on the characterization and kinetic data, that the EST-4 from D. mulleri and from D. arizonae presented biochemical and functional differentiation as they showed different properties compared to the substrate used, and slight differences with respect to the characterization tests.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESAcesso AbertoDisponível desde: 2015-12-04Made available in DSpace on 2016-09-20T12:29:26Z (GMT). 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