Desenvolvimento de peptídeos baseados em defensina vegetal para detecção da proteína spike de sars-cov-2.

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Fernandes, Leonardo Antonio
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/33523/0013000006ptw
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: COVID-19; Defensina; Diagnóstico; ECA2; Spike
• Link de acesso: https://repositorio.udesc.br/handle/UDESC/22675

A ligação da proteína Spike do SARS-CoV-2 ao receptor enzima conversora de angiotensina 2 (ECA2) expresso nas células hospedeiras é uma etapa inicial crítica para a infecção viral. Essa interação pode ser bloqueada pela inibição competitiva por uma proteína ECA2 solúvel. Portanto, desenvolver ligantes ECA2- miméticos de alta afinidade e ótimo custo-benefício que interrompam essa interação proteína-proteína é uma estratégia promissora para diagnóstico e terapia viral. Neste trabalho, utilizou-se como arcabouço uma defensina vegetal - uma classe de proteínas pequenas (2-5 kDa) e altamente estáveis contendo alfa-hélice, conformacionalmente restrita por duas pontes dissulfeto. Deste modo, projetou-se os resíduos de aminoácidos na alfa-hélice restrita da defensina vegetal para mimetizar os resíduos críticos da hélice 1 da ECA2 que interagem com a proteína Spike de SARSCoV-2. As proteínas modificadas (p-deface2, pdeface2-mut, p-deface2-loop) foram solúveis e purificadas até a homogeneidade com alto rendimento a partir de um sistema de expressão bacteriana. As proteínas demonstraram termoestabilidade excepcional, ligação de alta afinidade à proteína Spike com valores aparentes de Kd de 33,5 ± 8,2 e 14,4 ± 3,5 nM para p-deface2 e p- deface2- mut, respectivamente. Este trabalho aborda o desafio de desenvolver ECA2- miméticos helicoidais, demonstrando que as defensinas fornecem arcabouços promissores para projetar alfa-hélices em uma forma restrita para projetar ligantes de alta afinidade.