Sensibilidade antifúgica e fatores de virulência de Candida ssp. isoladas do ducto nasolacrimal e conjuntiva ocular de equinos
| Ano de defesa: | 2015 |
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| Tipo de documento: | Tese |
| Tipo de acesso: | Acesso aberto |
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| Instituição de defesa: |
Universidade Estadual do Ceará
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| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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| Departamento: |
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| País: |
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| Palavras-chave em Português: | |
| Link de acesso: | https://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=86119 |
Resumo: | <div><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">O gênero Candida é composto por leveduras que vivem como comensais na microbiota de homens e diversas espécies de animais. As pesquisas acerca da microbiota de Candida spp. em equinos ainda são poucas quando comparados aos trabalhos em humanos. Dessa forma, o objetivo desta pesquisa foi identificar Candida spp. isoladas da mucosa conjuntival e ducto nasolacrimal de equinos e determinar a sensibilidade in vitro destas leveduras ante a anfotericina B, fluconazol, itraconazol e caspofungina, bem como avaliar a produção dos fatores de virulência proteases e fosfolipases, dos isolados oriundos do ducto nasolacrimal e de biofilme pelas cepas provenientes da mucosa conjuntival. Para a obtenção de Candida spp. foram coletadas amostras 103 equinos, escolhidos aleatoriamente, no Estado do Ceará, Nordeste do Brasil. Para coleta de amostras da conjuntiva ocular e saída do ducto nasolacrimal foram utilizados swabs estéreis de algodão e para o lúmen do ducto nasolarimal foi feita instilação de 2mL de solução salina, via sonda uretral. Os isolados foram avaliados separadamente conforme o sítio anatômico. Dessa forma, um total de 77 isolados de Candida foram obtidas a partir do ducto nasolacrimal, com C. famata como a espécie mais prevalente, seguida por C. tropicalis, C. guilliermondii e C. parapsilosis lato sensu. As cepas foram submetidas a teste de sensibilidade in vitro por meio do método de microdiluição em caldo, protocolo M27-A3, padronizado pelo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Como resultado, um isolado de C. glabrata foi resistente a caspofungina, um isolado de C. parapsilosis lato sensu foi resistente apenas ao fluconazol, 11 foram resistentes somente a itraconazol (7 C. tropicalis, 2 C. guilliermondii, 1 C. famata, 1 C. parapsilosis sensu lato), enquanto oito C. tropicalis apresentaram resistência a ambos os azólicos. Nos testes de produção enzimática, 28 isolados produziram fosfolipases e 12 produziram proteases. No tocante a mucosa conjuntival foram isoladas 15 cepas de Candida, sendo C. tropicalis a espécie mais isolada, seguida por C. parapsilosis lato sensu, C. glabrata, C. rugosa, C. famata, C. ciferrii, C. guilliermondii, C. catenulata e C. krusei. Os isolados foram avaliados quanto a capacidade de formação de biofilme e sensibilidade do biofilme formado a drogas antifúngicas. Do total de isolados testados, somente oito cepas apresentaram-se capazes de produzir biofilme, 3 C. tropicalis, 2 C. glabrata, 1 C. parapsilosis lato sensu, 1 C. guilliermondii e 1 C. catenulate. Inicialmente foi determinada a concentração inibitória mínima (CIM) dos isolados em sua forma planctônica. Em seguida, a sensibilidade antifúngica dos biofilmes maduros foi avaliada utilizando a concentração de 10xCIM e 50xCIM das drogas testadas. Uma cepa de C. tropicalis não apresentou sensibilidade após a exposição a qualquer dos antifúngicos testados, enquanto que a atividade metabólica do biofilme de cinco isolados sofreu reduções apenas após exposição a anfotericina B na concentração de 50xCIM. Uma cepa de C. parapsilosis lato sensu e uma cepa de C. glabrata mostrou redução significativa do biofilme após a exposição ao fluconazol, itraconazol e caspofungina, mas não frente a anfotericina B. Estes resultados destacam a importância de se investigar a sensibilidade antifúngica e os fatores de virulência de Candida spp. da microbiota do ducto nasolacrimal e mucosa conjuntival de equinos visto que apresentam isolados resistentes as drogas antifúngicas mais comumente usadas na medicina humana e também por demonstrarem produção dos fatores de virulência. </span></font></div><div>Palavras-chave: Equinos. Microbiota. Sensibilidade antifúngica. Resistencia. Virulência.</div> |
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Sensibilidade antifúgica e fatores de virulência de Candida ssp. isoladas do ducto nasolacrimal e conjuntiva ocular de equinosEquinos Microbiota Sensibilidade antifúngica<div><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">O gênero Candida é composto por leveduras que vivem como comensais na microbiota de homens e diversas espécies de animais. As pesquisas acerca da microbiota de Candida spp. em equinos ainda são poucas quando comparados aos trabalhos em humanos. Dessa forma, o objetivo desta pesquisa foi identificar Candida spp. isoladas da mucosa conjuntival e ducto nasolacrimal de equinos e determinar a sensibilidade in vitro destas leveduras ante a anfotericina B, fluconazol, itraconazol e caspofungina, bem como avaliar a produção dos fatores de virulência proteases e fosfolipases, dos isolados oriundos do ducto nasolacrimal e de biofilme pelas cepas provenientes da mucosa conjuntival. Para a obtenção de Candida spp. foram coletadas amostras 103 equinos, escolhidos aleatoriamente, no Estado do Ceará, Nordeste do Brasil. Para coleta de amostras da conjuntiva ocular e saída do ducto nasolacrimal foram utilizados swabs estéreis de algodão e para o lúmen do ducto nasolarimal foi feita instilação de 2mL de solução salina, via sonda uretral. Os isolados foram avaliados separadamente conforme o sítio anatômico. Dessa forma, um total de 77 isolados de Candida foram obtidas a partir do ducto nasolacrimal, com C. famata como a espécie mais prevalente, seguida por C. tropicalis, C. guilliermondii e C. parapsilosis lato sensu. As cepas foram submetidas a teste de sensibilidade in vitro por meio do método de microdiluição em caldo, protocolo M27-A3, padronizado pelo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Como resultado, um isolado de C. glabrata foi resistente a caspofungina, um isolado de C. parapsilosis lato sensu foi resistente apenas ao fluconazol, 11 foram resistentes somente a itraconazol (7 C. tropicalis, 2 C. guilliermondii, 1 C. famata, 1 C. parapsilosis sensu lato), enquanto oito C. tropicalis apresentaram resistência a ambos os azólicos. Nos testes de produção enzimática, 28 isolados produziram fosfolipases e 12 produziram proteases. No tocante a mucosa conjuntival foram isoladas 15 cepas de Candida, sendo C. tropicalis a espécie mais isolada, seguida por C. parapsilosis lato sensu, C. glabrata, C. rugosa, C. famata, C. ciferrii, C. guilliermondii, C. catenulata e C. krusei. Os isolados foram avaliados quanto a capacidade de formação de biofilme e sensibilidade do biofilme formado a drogas antifúngicas. Do total de isolados testados, somente oito cepas apresentaram-se capazes de produzir biofilme, 3 C. tropicalis, 2 C. glabrata, 1 C. parapsilosis lato sensu, 1 C. guilliermondii e 1 C. catenulate. Inicialmente foi determinada a concentração inibitória mínima (CIM) dos isolados em sua forma planctônica. Em seguida, a sensibilidade antifúngica dos biofilmes maduros foi avaliada utilizando a concentração de 10xCIM e 50xCIM das drogas testadas. Uma cepa de C. tropicalis não apresentou sensibilidade após a exposição a qualquer dos antifúngicos testados, enquanto que a atividade metabólica do biofilme de cinco isolados sofreu reduções apenas após exposição a anfotericina B na concentração de 50xCIM. Uma cepa de C. parapsilosis lato sensu e uma cepa de C. glabrata mostrou redução significativa do biofilme após a exposição ao fluconazol, itraconazol e caspofungina, mas não frente a anfotericina B. Estes resultados destacam a importância de se investigar a sensibilidade antifúngica e os fatores de virulência de Candida spp. da microbiota do ducto nasolacrimal e mucosa conjuntival de equinos visto que apresentam isolados resistentes as drogas antifúngicas mais comumente usadas na medicina humana e também por demonstrarem produção dos fatores de virulência. </span></font></div><div>Palavras-chave: Equinos. Microbiota. Sensibilidade antifúngica. Resistencia. Virulência.</div><div><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">The genus Candida is composed of yeasts that inhabit as commensals in the microbiota of men and several animal species. Researches on the microbiota of Candida spp. in horses are still few compared to studies in humans. Thus, the objective of this research was to identify Candida spp. isolated from the conjunctival mucosa and nasolacrimal duct of horses, determine the in vitro susceptibility of these yeasts against amphotericin B, fluconazole, itraconazole, and caspofungin and evaluate the production of the virulence factors: proteases and phospholipases for the strains isolated from the nasolacrimal duct and biofilm for the strains isolated from the conjunctival mucosa. To obtain Candida spp., samples were collected from 103 horses, chosen ramdonly, in Ceará State, northeast Brazil. To collect the samples from ocular conjunctiva and from the region around the nasolacrimal duct, sterile swabs were used, and for the lumen of nasolarimal duct, instillation of 2 mL saline with aid of a urethral probe was performed. Isolates were evaluated separately according to the anatomical site. Thus, a total of 77 Candida isolates were obtained from the nasolacrimal duct, being C. famata the most prevalent species, followed by C. tropicalis, C. guilliermondii and C. parapsilosis lato sensu. As cepas foram submetidas a teste de sensibilidade in vitro por meio do método de microdiluição em caldo, protocolo M27-A3, padronizado pelo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Strains were subjected to in vitro susceptibility testing by microdilution broth method, M27-A3 protocol, standardized by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). As result, an isolate of C. glabrata was resistant to caspofungin, an isolate of C. parapsilosis lato sensu was resistant only to fluconazole, 11 strains were resistant only to itraconazole (7 C. tropicalis, 2 C. guilliermondii, 1 C. famata, 1 C. parapsilosis sensu lato), and eight C. tropicalis were resistant to both tested azoles. Regarding the enzymatic production assay, 28 isolates produced phospholipases and 12 isolates produced proteases. As for the conjunctival mucosa, 15 strains of Candida were isolated, being C. tropicalis the most isolated specie, followed by C. parapsilosis lato sensu, C. glabrata, C. rugosa, C. famata, C. ciferrii, C. guilliermondii, C. krusei and C. catenulata. Isolates were evaluated for biofilm-forming ability and susceptibility of the formed biofilm against antifungal drugs. Of all isolates tested, only eight strains showed capacity of producing biofilm (3 C. tropicalis, 2 C. glabrata, 1 C. parapsilosis lato sensu, 1 C. guilliermondii and 1 C. catenulata). Initially, the minimum inhibitory concentration (MIC) was determinated for the isolates in their planktonic form. Then, the antifungal susceptiblity of mature biofilms was evaluated using concentrations of 10xMIC and 50xMIC of the antinfungal drugs. A strain of C. tropicalis did not show susceptibility to any of the tested antifungal agents, whereas the metabolic activity of the biofilm from five isolates had decrease only after exposure to amphotericin B at concentration of 50xMIC. A strain of C. parapsilosis lato sensu and a strain of C. glabrata showed a significant reduction of mature biofilm after exposure to fluconazole, itraconazole, and caspofungin, but not against amphotericin B. These results highlight the importance of investigating the antifungal susceptibility and virulence factors of Candida spp. from the microbiota of the nasolacrimal duct and conjunctival mucosa of horses once these sites can harbor isolates presenting resistance to the antifungal drugs most often used in human medicine and also demonstrate the production of virulence factors. </span></font></div><div>Keywords: Equine. Microbiota. Antifungal susceptibility. Resistance. Virulence.</div>Universidade Estadual do CearáMarcos Fabio Gadelha RochaVago, Paula Bittencourt2019-06-26T13:56:59Z2015info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfhttps://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=86119info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UECEinstname:Universidade Estadual do Cearáinstacron:UECE2019-06-26T13:56:59Zoai:uece.br:86119Repositório InstitucionalPUBhttps://siduece.uece.br/siduece/api/oai/requestopendoar:2019-06-26T13:56:59Repositório Institucional da UECE - Universidade Estadual do Cearáfalse |
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