Clonagem e análise genética do gene iss, e avaliação da atividade do anticorpo IgY anti-proteína recombinante Iss de Escherichia coli patogênica para aves (APEC)

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2024
Autor(a) principal: Baptista, Ana Angelita Sampaio
Orientador(a): Vidotto, Marilda Carlos [Orientador]
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Colibacilose aviária
Escherichia coli
Ave
Doenças
Colibacillosis
Birds
Diseases
Link de acesso: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/11113
Resumo: Resumo: Amostras de Escherichia coli patogênica para aves (APEC) são responsáveis pela colibacilose aviária, a qual é uma das principais causas de prejuízos econômicos na avicultura industrial moderna decorrente do aumento da mortalidade, custos com tratamento e condenação de carcaças no abatedouro A patogenicidade das amostras de APEC está relacionada à presença de um ou mais fatores de virulência, sendo um dos principais fatores, a proteína Iss, codificada pelo gene iss (increased serum survive) Esta proteína confere ao microorganismo resistência ao sistema complemento, aumentando sua capacidade em sobreviver no soro Os objetivos deste trabalho foram clonar e seqüenciar o gene iss e caracterizar a proteína Iss recombinante de Escherichia coli patogênica para aves (APEC) O gene iss da amostra APEC9 foi clonado no vetor pET SUMO e sub-clonado no vetor pET3 Este gene, após o sequenciamento, foi classificado como iss tipo 1, pela diferenciação dos três tipos de alelos do gene iss A proteína Iss-SUMO apresentou 22 kDa, sendo 11kDa da proteína de fusão SUMO e 11 kDa da Iss, expressa em BL21 (DE3) e purificada por coluna de afinidade ao níquel A massa molecular da Iss recombinante (rISS), quando o gene foi sub-clonado no vetor pET3, apresentou 14 kDa Esta proteína foi utilizada para a imunização de galinhas poedeiras, as quais apresentaram resposta imune humoral pelo teste de ELISA Os anticorpos IgY anti-rIss, purificados dos ovos das galinhas imunizadas, reagiram com rIss por Western blot e foram utilizados nos testes de inibição de resistência sérica e teste de imunoproteção de pintainhos Os resultados demonstraram a inibição do crescimento bacteriano na presença de complemento e a diminuição do escore de lesão por aerossaculite nos pintainhos Os resultados obtidos ampliam perspectivas de novas investigações a respeito da proteína Iss
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Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência AnimalAbstract: Escherichia coli strains designated as avian pathogenic E coli (APEC) are responsible to avian colibacillosis, which is the principal cause of high economic losses in the modern poultry industry, due the increase of mortality, medication cost and condemnation of carcasses The APEC pathogenicity is related to presence of several virulence factors, being the Iss (Increased survives Serum) protein a principal responsible characteristic of resistance to complement system, increasing its capacity to survive in the serum The objectives of this work were both study the diversity sequence iss gene from APEC and characterize the recombinant Iss protein by its biological activity The iss gene from APEC 9 strain of 39 pb was cloned in the pET SUMO vector and sub-cloned in the pET 3 The iss gene was classified as iss type 1 by differentiation of the three iss gene allele types The recombinant protein (rIss) was expressed in E coli BL21 (DE3) by induction of IPTG and purified in resin charged with the nickel ion The molecular mass of rIss-SUMO was 22 kDa, corresponding 11 kDa of Iss protein and 11 kDa SUMO protein and the rIss from pET3 was14 kDa The rIss was used to immunize hens and the results showed induction of immune response Antibodies IgY anti rIss, purified from eggs of immunized hens, reacted by Western blotting with rIss showing specific molecular mass and they were utilized in the serum resistance inhibition tests and The results demonstrated inhibition the bacterial grown in the serum and decrease of lesions score in the chicken one day old In conclusion, the iss gene from APEC 9 strain is the genotype 1 that is highly prevalent among APEC and it could be used in diagnostic protocols, and these data increase the perspectives of new investigation about Iss proteinporColibacilose aviáriaEscherichia coliAveDoençasColibacillosisBirdsDiseasesClonagem e análise genética do gene iss, e avaliação da atividade do anticorpo IgY anti-proteína recombinante Iss de Escherichia coli patogênica para aves (APEC)info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisMestradoCiência AnimalCentro de Ciências AgráriasPrograma de Pós-graduação em Ciência Animal-1-1reponame:Repositório Institucional da UELinstname:Universidade Estadual de Londrina (UEL)instacron:UELinfo:eu-repo/semantics/openAccess124300vtls000148293SIMvtls000148293http://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls00014829364.00SIMhttp://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000148293799.pdf123456789/602 - 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