Desenvolvimento de método para diagnóstico da paracoccidioidomicose humana utilizando antígeno recombinante de Paracoccidioides brasiliensis

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2024
Autor(a) principal: Assunção, Tatiana Reichert da Silva
Orientador(a): Ono, Mário Augusto [Orientador]
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Paracoccidioidomicose
Diagnóstico
Paracoccidioides brasiliensis
Antígenos de fungos
Micoses fungóides
Diagnosis
Fungal antigens
Fungoid mycosis
Paracoccidioidomycosis
Link de acesso: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/13232
Resumo: Resumo: Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada por Paracoccidioides brasiliensis É considerada a micose sistêmica de maior prevalência na América do Sul, principalmente no Brasil, o qual apresenta o maior número de casos A glicoproteína de 43 kDa, gp43, é o principal antígeno utilizado no diagnóstico e epidemiologia da PCM O objetivo deste trabalho foi produzir gp43 recombinante na forma solúvel para utilização no diagnóstico de PCM humana Para a produção da proteína recombinante, primeiramente o gene gp43 foi clonado em vetor de expressão pETTEV Algumas construções do gene neste vetor foram feitas com a finalidade de obter melhor expressão e solubilidade da proteína Para isso, foram realizadas estratégias para deleção de 2 aminoácidos das regiões N-terminal e/ou C-terminal A proteína, com deleção na região N-terminal (gp43?Nt), foi produzida em E coli BL21 e purificada por cromatografia de afinidade Sua reatividade foi avaliada empregando-se soros de pacientes com PCM A gp43?Nt, apesar de ter sido obtida na forma insolúvel, apresentou semelhanças em relação à gp43 nativa e foi reconhecida por soros de pacientes com PCM nos testes de ELISA indireto, Western blot e dot blot Os melhores resultados foram observados quando utilizada em dot blot, apresentando 1% de correlação com o teste de Imunodifusão Radial Dupla (IDRD) que é o método mais usado no diagnóstico da micose Portanto, o teste de dot blot com gp43?Nt pode ser útil no diagnóstico da PCM em humanos
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Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Patologia ExperimentalAbstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by Paracoccidioides brasiliensis It is considered the most prevalent systemic mycosis in South America, mainly in Brazil, which presents the largest number of cases The 43 kDa glycoprotein, gp43, is the main antigen used for diagnosis and epidemiology of PCM The objective of this work was the production of the recombinant gp43 in soluble form for use in the diagnosis of human PCM For the production of recombinant protein, first the gp43 gene was cloned in pETTEV expression vector Some gene constructs in this vector were made in order to obtain better expression and solubility of protein For this, were carried out strategies for deletion of 2 amino-acid in the N-terminal and/or C-terminal regions The protein, with deletion in N-terminal (gp43?Nt), was produced at E coli BL21 and purified by affinity chromatography Its reactivity was evaluated using sera from patients with PCM The gp43?Nt, despite having been obtained in insoluble form, showed similarities with native gp43 and was recognized by sera from patients with PCM in indirect ELISA test, Western blot and dot blot The best results were observed when used in dot blot, presenting 1% of correlation with the double radial immunodiffusion test (IDRD), which is the widely used method in the diagnosis of this mycosis Therefore, dot blot wiht gp43?Nt may be useful for PCM diagnosis in humansporParacoccidioidomicoseDiagnósticoParacoccidioides brasiliensisAntígenos de fungosMicoses fungóidesDiagnosisFungal antigensFungoid mycosisParacoccidioidomycosisDesenvolvimento de método para diagnóstico da paracoccidioidomicose humana utilizando antígeno recombinante de Paracoccidioides brasiliensisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisMestradoPatologia ExperimentalCentro de Ciências BiológicasPrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimental-1-1reponame:Repositório Institucional da UELinstname:Universidade Estadual de Londrina (UEL)instacron:UELinfo:eu-repo/semantics/openAccess153908vtls000172306SIMvtls000172306http://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls00017230664.00SIMhttp://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls0001723063126.pdf123456789/2702 - 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