Avaliação dos efeitos do monastrol em linhagens celulares humanas de adenocarcinoma de mama (MCF-7) e epitélio mamário (HB4a)
Ano de defesa: | 2024 |
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Resumo: | Resumo: O câncer de mama é a neoplasia que mais acomete as mulheres de todo mundo e a que representa as maiores taxas de mortalidade nesse grupo A maioria das drogas antineoplásicas atuais não apresentam seletividade e, portanto, afetam tanto as células tumorais quanto as saudáveis Dessa forma, a busca por novas drogas anticâncer é de grande interesse O monastrol é uma molécula sintética que atua como inibidor alostérico da cinesina mitótica Eg5 Estudos mostram que esta cinesina está superexpressa em células tumorais quando comparadas com células normais Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi investigar o efeito antiproliferativo do monastrol em célula humana tumoral de adenocarcinoma mamário (MCF-7) e não tumoral de epitélio de mama (HB4a) As células MCF-7 e HB4a foram expostas ao monastrol nas concentrações de 5, 25, 5, 75 e 1 µM para a análise de citotoxicidade (ensaio MTT) e proliferação celular (Real-time Cell Analyzer); e nas concentrações de 25 e 5 µM para os demais testes Foram avaliadas por citometria de fluxo a dinâmica do ciclo celular (Iodeto de propídeo) e indução de apoptose (Anexina V), além da obtenção de índice mitótico e apoptótico por análise morfológica com coloração de Hoechst 33342 Os níveis de mRNA de genes do ciclo celular (TP53, EG5, CCNA2, CCNB1, CCND1, CCNE1, CDC25A, CDC25C, CDKN1A, CDKN1B e CDKN1C), sinalizador de danos (GADD45A) e apoptose (BAX, BAK, BCL2 e BCLXL) foram verificados por RT-qPCR No ensaio de citotoxicidade, o monastrol reduziu a viabilidade em relação ao controle apenas na linhagem tumoral MCF-7 a partir da concentração de 5 µM Na avaliação da proliferação celular em tempo real também houve uma queda na proliferação das células MCF-7, enquanto as células HB4a não apresentaram alterações na cinética de crescimento A análise da apoptose mostrou que o monastrol não induz morte celular por apoptose em nenhuma das linhagens celulares Já na análise do ciclo celular, a exposição das células MCF-7 ao monastrol (5 µM) levou ao aumento da população G1 e G2/M com concomitante diminuição de S, enquanto na linhagem celular HB4a houve aumento de G2/M e diminuição de G1 Ambas células apresentaram aumento dos níveis de índice mitótico A análise da expressão gênica demonstrou que o monastrol aumentou em 5 vezes os níveis de RNAm do gene CDKN1A nas células MCF-7 e reduziu em 2 vezes os níveis de RNAm de CDKN1C na linhagem HB4a Estes resultados sugerem que o monastrol possui maior citotoxicidade sobre as células tumorais MCF-7, quando comparados com as células não tumorais HB4a, tornando-o um possível quimioterápico anticâncer |
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Avaliação dos efeitos do monastrol em linhagens celulares humanas de adenocarcinoma de mama (MCF-7) e epitélio mamário (HB4a)Células cancerosasMamasCâncerCiclo celularGenéticaCancer cellsBreastCell cycleCancerResumo: O câncer de mama é a neoplasia que mais acomete as mulheres de todo mundo e a que representa as maiores taxas de mortalidade nesse grupo A maioria das drogas antineoplásicas atuais não apresentam seletividade e, portanto, afetam tanto as células tumorais quanto as saudáveis Dessa forma, a busca por novas drogas anticâncer é de grande interesse O monastrol é uma molécula sintética que atua como inibidor alostérico da cinesina mitótica Eg5 Estudos mostram que esta cinesina está superexpressa em células tumorais quando comparadas com células normais Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi investigar o efeito antiproliferativo do monastrol em célula humana tumoral de adenocarcinoma mamário (MCF-7) e não tumoral de epitélio de mama (HB4a) As células MCF-7 e HB4a foram expostas ao monastrol nas concentrações de 5, 25, 5, 75 e 1 µM para a análise de citotoxicidade (ensaio MTT) e proliferação celular (Real-time Cell Analyzer); 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and at concentrations of 25 and 5 µM for the other tests In flow cytometry are assessed dynamics of the cell cycle (propidium iodide) and induction of apoptosis (Annexin V), as well as for morphological analysis obtaining mitotic and apoptotic index by staining with Hoechst 33342 The mRNA levels of cell cycle gene (P53, EG5, CCNA2, CCNB1, CCND1, CCNE1, CDC25A, CDC25C, CDKN1A, CDKN1B and CDKN1C), the damage indicator (GADD45A) and apoptosis (BAX, BAK, BCL2 and BCLXL) were verified by RT-qPCR In the cytotoxicity assay, monastrol reduced viability only in MCF-7 tumor, compared to the control, from the concentration of 5 uM In real-time cell analyzer was also a decrease in the proliferation of MCF-7 cells, while the HB4a curve showed no change in growth kinetics Monastrol does not induce cell death by apoptosis in any of the cell lines In the analysis of the cell cycle, monastrol (5 µM) increased the population of MCF-7 cells in G1 and G2 / M with a concomitant decrease in S, whereas the cell line HB4a an increase of the G2 / M population and decrease of the G1 Both cells showed increases in mitotic index levels The gene expression analysis showed that monastrol increased 5 fold the levels of mRNA CDKN1A gene in MCF-7 cells and reduced the mRNA levels CDKN1C in lineage HB4a by 2-fold These results suggest that monastrol has higher cytotoxicity on MCF-7 tumor cells compared to non-tumor cells HB4a, making it possible anticancer chemotherapyMantovani, Mário Sérgio [Orientador]Lepri, Sandra ReginaCaetano, Lucia GiulianoMarques, Lilian Areal2024-05-01T14:08:38Z2024-05-01T14:08:38Z2015.0031.03.2015info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/13169porMestradoGenética e Biologia MolecularCentro de Ciências BiológicasPrograma de Pós-graduação em Genética e Biologia MolecularEMBRAPALondrinareponame:Repositório Institucional da UELinstname:Universidade Estadual de Londrina (UEL)instacron:UELinfo:eu-repo/semantics/openAccess2024-07-12T04:19:45Zoai:repositorio.uel.br:123456789/13169Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.bibliotecadigital.uel.br/PUBhttp://www.bibliotecadigital.uel.br/OAI/oai2.phpbcuel@uel.br||opendoar:2024-07-12T04:19:45Repositório Institucional da UEL - Universidade Estadual de Londrina (UEL)false |
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Resumo: O câncer de mama é a neoplasia que mais acomete as mulheres de todo mundo e a que representa as maiores taxas de mortalidade nesse grupo A maioria das drogas antineoplásicas atuais não apresentam seletividade e, portanto, afetam tanto as células tumorais quanto as saudáveis Dessa forma, a busca por novas drogas anticâncer é de grande interesse O monastrol é uma molécula sintética que atua como inibidor alostérico da cinesina mitótica Eg5 Estudos mostram que esta cinesina está superexpressa em células tumorais quando comparadas com células normais Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi investigar o efeito antiproliferativo do monastrol em célula humana tumoral de adenocarcinoma mamário (MCF-7) e não tumoral de epitélio de mama (HB4a) As células MCF-7 e HB4a foram expostas ao monastrol nas concentrações de 5, 25, 5, 75 e 1 µM para a análise de citotoxicidade (ensaio MTT) e proliferação celular (Real-time Cell Analyzer); e nas concentrações de 25 e 5 µM para os demais testes Foram avaliadas por citometria de fluxo a dinâmica do ciclo celular (Iodeto de propídeo) e indução de apoptose (Anexina V), além da obtenção de índice mitótico e apoptótico por análise morfológica com coloração de Hoechst 33342 Os níveis de mRNA de genes do ciclo celular (TP53, EG5, CCNA2, CCNB1, CCND1, CCNE1, CDC25A, CDC25C, CDKN1A, CDKN1B e CDKN1C), sinalizador de danos (GADD45A) e apoptose (BAX, BAK, BCL2 e BCLXL) foram verificados por RT-qPCR No ensaio de citotoxicidade, o monastrol reduziu a viabilidade em relação ao controle apenas na linhagem tumoral MCF-7 a partir da concentração de 5 µM Na avaliação da proliferação celular em tempo real também houve uma queda na proliferação das células MCF-7, enquanto as células HB4a não apresentaram alterações na cinética de crescimento A análise da apoptose mostrou que o monastrol não induz morte celular por apoptose em nenhuma das linhagens celulares Já na análise do ciclo celular, a exposição das células MCF-7 ao monastrol (5 µM) levou ao aumento da população G1 e G2/M com concomitante diminuição de S, enquanto na linhagem celular HB4a houve aumento de G2/M e diminuição de G1 Ambas células apresentaram aumento dos níveis de índice mitótico A análise da expressão gênica demonstrou que o monastrol aumentou em 5 vezes os níveis de RNAm do gene CDKN1A nas células MCF-7 e reduziu em 2 vezes os níveis de RNAm de CDKN1C na linhagem HB4a Estes resultados sugerem que o monastrol possui maior citotoxicidade sobre as células tumorais MCF-7, quando comparados com as células não tumorais HB4a, tornando-o um possível quimioterápico anticâncer |
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