Produção direcionada de Di-Ramnolipídeo por cultivos de Pseudomonas aeruginosa PAO 1 e desenvolvimento de processo de purificação para obtenção de um único congênere

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Ana Paula Queiroz Mello
• Orientador(a): Doumit Camilios Neto .
• Banca de defesa: Cesar Augusto Tischer, Ismael Rodrigues Amador
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual de Londrina. Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas.
• País: BR
• Link de acesso: http://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000228135

Ramnolipídeos (RL) são biossurfactantes constituídos por uma ou duas moléculas de ramnose polar, respectivamente mono e di-ramnolipídeo, ligada a ácidos graxos β-hidroxilados, apolares, estrutura anfipática que lhes confere excelente propriedade tensoativa, detergente e emulsificante. São produzidos por bactérias Pseudomas aeruginosa numa mistura heterogênea contendo diversos congêneres de mono e di- ramnolipídeo. O principal congênere produzido, Di-RL Rha2C10C10 apresenta ação antibacteriana, antifúngica e cicatrizante, sendo atrativo para o desenvolvimento de produtos farmacológicos. Sabe-se que sua estrutura química está intimamente relacionada à atividade biológica, assim, a obtenção do Rha2C10C10 de forma isolada é de suma importância para garantir sua ação e potencial terapêutico. Contudo, a recuperação dessa biomolécula isolada ainda é um desafio, pois o processo de purificação de alto custo dificulta sua recuperação e aplicação. Nesse contexto, o presente trabalho objetiva a produção direcionada de di-ramnolipídeos a partir de cultivo em fermentação submersa de P. aeruginosa e desenvolvimento de processo viável e eficaz para purificação de um único congênere de interesse, Rha2C10C10. A produção de RL foi realizada por cultivo submerso de P. aeruginosa PAO1 em meio de sais (MSM) em frascos Erlenmeyer de 250 mL contendo 125 mL de meio de cultivo incubados por 9 dias, 37 °C e 200 rpm. Em seguida, realizou-se a extração líquido-líquido por clorofórmio/metanol para obtenção do extrato bruto concentrado, sendo obtidos 4,28 gramas do extrato bruto de RL por litro de meio cultivado. Para o processo de purificação, visando a recuperação do congênere Rha2C10C10 foram realizadas: (1) cromatografia líquida de alta eficiência preparativa (CLAEP); (2) cromatografia em camada delgada preparativa (CCDP); (3) cromatografia flash; e (4) separação por cartucho de sílica. A confirmação da presença de apenas um composto na amostra recuperada foi realizada por ressonância magnética nuclear de hidrogênio (1H RMN). As purificações por CLAEP, CCDP e flash foram ineficazes devido à presença de contaminantes no composto final, além de apresentarem maior dificuldade para realização e consumo elevado de solventes . Por outro lado, a separação com cartucho de sílica confeccionado em laboratório apresentou alto rendimento, eficácia para a obtenção do Di-RL Rha2C10C10 isolado e consumo reduzido de solventes. Ao final, foram recuperados 247 mg da biomolécula isolada com grau de pureza de 82%. O método apresentou vantagens de simples execução, não oneroso e reduzido consumo de solventes orgânicos. Conclui-se que o processo de purificação desenvolvido com cartucho de sílica para obtenção do congênere Rha2C10C10 foi realizado com êxito, sendo uma potencial alternativa para recuperação e aplicação da biomolécula em produtos farmacológicos.