Efeito de ExoU e papel de PAFR na expressão de citocinas relacionadas à inflamação em modelo murino de pneumonia aguda por Pseudomonas aeruginosa
| Ano de defesa: | 2014 |
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| Tipo de documento: | Dissertação |
| Tipo de acesso: | Acesso aberto |
| Idioma: | por |
| Instituição de defesa: |
Universidade do Estado do Rio de Janeiro
Centro Biomédico::Faculdade de Ciências Médicas BR UERJ Programa de Pós-Graduação em Microbiologia |
| Programa de Pós-Graduação: |
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| Departamento: |
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| País: |
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| Palavras-chave em Português: | |
| Link de acesso: | http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/14378 |
Resumo: | Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria Gram negativa oportunista de grande importância em infecções respiratórias adquiridas em ambiente hospitalar. ExoU é uma proteína bacteriana injetada no citosol de células hospedeiras pelo sistema de secreção do tipo III que está relacionada ao agravamento de infecções agudas. A ação de ExoU é decorrente da sua atividade tipo fosfolipase A2, que leva à liberação de ácido araquidônico e lisofosfolipídeos das membranas das células hospedeiras e posterior síntese de potentes mediadores da resposta inflamatória, como eicosanóides e o fator de ativação plaquetária (PAF). ExoU também é capaz de ativar NF-B, um fator transcricional que regula a síntese de moléculas implicadas na indução da resposta inflamatória. No presente estudo, a expressão de citocinas que participam da resposta inflamatória foi avaliada no pulmão de camundongos infectados com uma cepa produtora de ExoU (PA103) ou com sua mutante isogênica deficiente em ExoU (PA103∆exoU). Para isso, camundongos C57/BL6 foram tratados com o antagonista de PAF, WEB 2086, ou com o veículo e inoculados por via intratraqueal com P. aeruginosa ou salina. Após 24 horas, o RNA total dos pulmões foi purificado e convertido em cDNA para análise da expressão do mRNA de algumas citocinas por RT-PCR em tempo real. Nossos resultados mostraram um aumento significativo dos níveis de mRNA de todas as citocinas em resposta a ExoU, embora tenha sido observada uma grande variação dos níveis de expressão entre as moléculas. Além disso, o tratamento com WEB 2086 reduziu significativamente a expressão do mRNA de TNFα, IL-10, IL-6, IL-1β e IL-27 induzida por ExoU. Esses dados contribuem para a compreensão do papel de ExoU na patogênese e confirmam a importância do PAF como regulador da resposta inflamatória durante a pneumonia por P. aeruginosa |
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Efeito de ExoU e papel de PAFR na expressão de citocinas relacionadas à inflamação em modelo murino de pneumonia aguda por Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosaExoUCytokinesPAFPseudomonas aeruginosaExoUCitocinasPAFPseudomonasaeruginosaPulmões InfecçõesToxinas bacterianas Citocinas . 5. Fator de Ativação de Plaquetas Fisiologia. 6. Infecção hospitalar .CitocinasFator de Ativação de Plaquetas FisiologiaInfecção hospitalarCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIAPseudomonas aeruginosa é uma bactéria Gram negativa oportunista de grande importância em infecções respiratórias adquiridas em ambiente hospitalar. ExoU é uma proteína bacteriana injetada no citosol de células hospedeiras pelo sistema de secreção do tipo III que está relacionada ao agravamento de infecções agudas. A ação de ExoU é decorrente da sua atividade tipo fosfolipase A2, que leva à liberação de ácido araquidônico e lisofosfolipídeos das membranas das células hospedeiras e posterior síntese de potentes mediadores da resposta inflamatória, como eicosanóides e o fator de ativação plaquetária (PAF). ExoU também é capaz de ativar NF-B, um fator transcricional que regula a síntese de moléculas implicadas na indução da resposta inflamatória. No presente estudo, a expressão de citocinas que participam da resposta inflamatória foi avaliada no pulmão de camundongos infectados com uma cepa produtora de ExoU (PA103) ou com sua mutante isogênica deficiente em ExoU (PA103∆exoU). Para isso, camundongos C57/BL6 foram tratados com o antagonista de PAF, WEB 2086, ou com o veículo e inoculados por via intratraqueal com P. aeruginosa ou salina. Após 24 horas, o RNA total dos pulmões foi purificado e convertido em cDNA para análise da expressão do mRNA de algumas citocinas por RT-PCR em tempo real. Nossos resultados mostraram um aumento significativo dos níveis de mRNA de todas as citocinas em resposta a ExoU, embora tenha sido observada uma grande variação dos níveis de expressão entre as moléculas. Além disso, o tratamento com WEB 2086 reduziu significativamente a expressão do mRNA de TNFα, IL-10, IL-6, IL-1β e IL-27 induzida por ExoU. Esses dados contribuem para a compreensão do papel de ExoU na patogênese e confirmam a importância do PAF como regulador da resposta inflamatória durante a pneumonia por P. aeruginosaThe opportunistic Gram-negative bacteria Pseudomonas aeruginosa is an important pathogen in hospital acquired airways infections. ExoU is a bacterial protein injected into host cell cytosol by the type three secretion system that correlates with acute infection severity. The effect of ExoU relies on its phospholipase A2-like activity, which leads to host cell membrane lysis and consequent release of arachidonic acid and lysophospholipids, as well as synthesis of proinflammatory mediators, such as eicosanoids and platelet-activating factor (PAF). ExoU also activates NF-kB, a transcriptional factor that regulates the synthesis of a number of proinflammatory molecules. In the present study, the expression of cytokines involved in inflammatory responses was studied in a murine model of acute pneumonia in which C57/BL6 mice were intratracheally infected with an ExoU-producing P. aeruginosa strain (PA103) or its isogenic mutant ExoU-defective strain (PA103ΔexoU). To assess the role of PAF, mice were treated with the PAF antagonist WEB 2086, or with vehicle, and inoculated with PA103 suspension or saline. After 24 hours, total lung RNA was purified and converted to cDNA for analysis of the expression of same cytokines. Our results showed that mRNA levels of the proinflammatory cytokines IL-1-β, TNFα and IL-6, the antiinflamatory cytokine IL-10 and the recently described cytokine IL-27 were significantly higher in lungs of mice infected with the ExoU-producing strain than in lungs of mice infected with the ExoU-defective mutant. Furthermore, the evaluation of C57/BL6 mice treated with the PAF antagonist WEB 2086 before P. aeruginosa infection revealed that induction of cytokines by ExoU depends on PAFR signaling. These data contributes to the comprehension of the role of ExoU in pathogenesis and confirm the importance of PAF as an important regulator of inflammatory response during pneumonia by ExoU-producing P. aeruginosa strainsFundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de JaneiroUniversidade do Estado do Rio de JaneiroCentro Biomédico::Faculdade de Ciências MédicasBRUERJPrograma de Pós-Graduação em MicrobiologiaSaliba, Alessandra Mattoshttp://lattes.cnpq.br/6134920105834158Assis, Maria Cristina dehttp://lattes.cnpq.br/1549678564972708Hirata Júnior, Raphaelhttp://lattes.cnpq.br/4484092525465200Manfro, Wânia Ferraz Pereirahttp://lattes.cnpq.br/5850137312836330Flores, Vinícius Ribeiro2021-01-07T15:15:24Z2018-11-092014-02-24info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfFLORES, Vinícius Ribeiro. Efeito de ExoU e papel de PAFR na expressão de citocinas relacionadas à inflamação em modelo murino de pneumonia aguda por Pseudomonas aeruginosa. 2014. 51 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica Humana) - Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2014.http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/14378porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UERJinstname:Universidade do Estado do Rio de Janeiro (UERJ)instacron:UERJ2024-02-26T22:54:45Zoai:www.bdtd.uerj.br:1/14378Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.bdtd.uerj.br/PUBhttps://www.bdtd.uerj.br:8443/oai/requestbdtd.suporte@uerj.bropendoar:29032024-02-26T22:54:45Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UERJ - Universidade do Estado do Rio de Janeiro (UERJ)false |
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