Padronização e avaliação de um sistema de PCR quantitativo para diagnóstico molecular da hanseníase

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Moreira, Suelen Justo Maria
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade do Estado do Rio de Janeiro; Centro Biomédico::Instituto de Biologia Roberto Alcantara Gomes; Brasil; UERJ; Programa de Pós-Graduação em Saúde, Medicina Laboratorial e Tecnologia Forense
• Palavras-chave em Português: Hanseníase - Diagnóstico; Mycobacterium leprae; Controle interno de amplificação; 18S2 ribossomal; Reação em cadeia de polimerase; Amplificação de genes; RNA Ribossômico 16S; qPCR; 16S rRNA; Leprosy; Internal amplification control; Ribossomal 18S2; CIENCIAS BIOLOGICAS
• Link de acesso: http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/22996

A hanseníase persiste como um problema de saúde pública no mundo, apesar dos esforços para a sua eliminação. O número de pessoas infectadas por Mycobacterium leprae e que desenvolvem a doença, contribui para que o Brasil seja um dos países com uma das taxas mais altas de novos casos de hanseníase no mundo. É sabido que os indivíduos que convivem em proximidade com os pacientes hansenianos apresentam maior risco de desenvolverem a doença. Esta é causada por um patógeno intracelular obrigatório, Mycobacterium leprae, que não é cultivável in vitro; tal característica dificulta as estratégias clássicas de diagnóstico que se baseiam em testes bacteriológicos e/ou histopatológicos. O diagnóstico precoce da hanseníase em áreas endêmicas requer testes efetivos para identificar indivíduos em risco de desenvolver a doença antes da manifestação clínica. Com o intuito de dar suporte ao diagnóstico clínico, métodos moleculares com altas sensibilidade e especificidade, como a reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR), vêm sendo empregados no diagnóstico dos pacientes. O objetivo geral do presente estudo foi desenvolver e padronizar um sistema multiplex de qPCR que fosse eficiente para o diagnóstico de hanseníase. O kit é composto por reagentes nacionais (fabricados pelo Instituto de Biologia Molecular do Paraná – FIOCRUZ), desenvolvido em forma de um sistema multiplex que contém um alvo molecular como controle de qualidade. O sistema multiplex desenvolvido foi capaz de detectar a presença do DNA do patógeno (alvo 16S rRNA) e do paciente (alvo 18S2) na mesma reação. A eficiência do protocolo estabelecido foi alta (rho=0,99) para os dois alvos analisados e os parâmetros de validação foram satisfatórios, apresentando bons níveis de sensibilidade (0,65), especificidade (1) e acurácia (0,82). Os achados deste estudo demonstram a eficiência e a importância da qPCR como ferramenta para o diagnóstico precoce e complementar dentro de uma rotina laboratorial. Esse suporte à avaliação clínica poderia ocasionar o ínicio correto do tratamento quimioprofilático, o que contribuiria para a interrupção da cadeia de transmissão da hanseníase.