Separação imunomagnética de cistos teciduais e esporocistos de toxoplasma gondii pelo anticorpo monoclonal K8/15-15 e caracterização de sua proteína alvo por Western Blot e Imunoblot

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Gondim, Mariana Marrega Rezende
• Orientador(a): Silva, Aristeu Vieira da
• Banca de defesa: Vieira, Aristeu Vieira da, Pinho, Flaviane Alves de, Góis, Marcelo Biondaro, Franke, Carlos Roberto, Perinotto, Wendell Marcelo de Souza
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal da Bahia
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal nos Trópicos (PPGCAT)
• Departamento: Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Parasito; Proteômica; Antígeno; Coccídeos
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS
• Link de acesso: https://repositorio.ufba.br/handle/ri/41145

Toxoplasma gondii é um parasito intracelular obrigatório que infecta aproximadamente um terço da população mundial. A infecção horizontal do parasito ocorre, principalmente, pela ingestão de cistos teciduais contendo bradizoítos e/ou ingestão de oocistos esporulados. Assim, objetivou-se com o trabalho corrente, elaborar um protocolo de separação imunomagnética (SI) de cistos e esporocistos de T. gondii, e isolar a proteína reconhecida pelo anticorpo monoclonal (AcMo) K8/15-15. Esse foi o primeiro AcMo descrito capaz de reconhecer simultaneamente proteínas de cistos e esporocistos do parasito. Mais de 2.000 cistos produzidos in vitro foram isolados após a SI do conteúdo de um frasco de cultura de 25 cm 2 , além de um aumento em até seis vezes da relação cisto/célula hospedeira após SI. Cistos produzidos in vivo foram separados com êxito, sem contaminação ou debris de tecido murino. Esporocistos também foram isolados por SI, mostrando, assim, que o método de pode ser empregado para estudos proteômicos envolvendo paredes de cisto tecidual e esporocisto de T. gondii. Por meio da técnica de SI foi possível concentrar uma grande quantidade de cistos e, após imunoprecipitação, isolar o antígeno alvo marcado pelo AcMo K8/15-15. O antígeno foi separado por eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) e apresentou bandas de 272 e 381 kDa, identificadas por imunoblot e visualizadas em SDS PAGE corado com azul de Comassie. Os resultados aqui obtidos possibilitarão, em experimentos futuros, a completa caracterização da proteína alvo do AcMo K8/15-15, empregando-se, especialmente, sequenciamento por espectrometria de massas da proteína alvo. A proteína purificada pode ser testada em estudos envolvendo diagnóstico sorológico, assim como, para a produção de vacinas contra toxoplasmose.