Contribuições para o diagnóstico e epidemiologia da leptospirose em ovinos criados em condições semiáridas.

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2020
Autor(a) principal: NOGUEIRA, Denise Batista. lattes
Orientador(a): AZEVEDO, Sérgio Santos de. lattes
Banca de defesa: ALVES, Clebert José., COSTA, Diego Figueiredo da.
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Federal de Campina Grande
Programa de Pós-Graduação: PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIA E SAÚDE ANIMAL
Departamento: Centro de Saúde e Tecnologia Rural - CSTR
País: Brasil
Palavras-chave em Português:
Área do conhecimento CNPq:
Link de acesso: https://dspace.sti.ufcg.edu.br/handle/riufcg/25584
Resumo: Em regiões de clima semiárido existem fatores ambientais que são adversos à sobrevivência e propagação das leptospiras, assim o papel das peculiaridades nas rotas de transmissão que independem do ambiente precisam ser melhor investigadas. Dessa forma, buscou-se gerar contribuições para o diagnóstico e epidemiologia da infecção por Leptospira sp. em ovinos criados em condições semiáridas. No Capítulo I, descreveu um estudo a partir de 104 ovelhas fêmeas adultas amostradas durante o período seco e chuvoso, compreendidos entre os anos de 2018 e 2019. Coletou-se na linha de abate amostras de fluido vaginal, urina, bexiga, rim, útero, tuba uterina, ovário e placenta para posterior detecção molecular por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR). As amostras de melhores reações foram amplificadas e submetidas ao sequenciamento genético. Para o cultivo bacteriológico, apenas fluido vaginal e urina foram utilizados, enquanto o sangue foi destinado à investigação sorológica por meio do teste de aglutinação microscópica (SAM). No total, foram detectados anticorpos anti- Leptospira sp. em 26 (25%) dos animais analisados pela SAM na diluição inicial 1:50, enquanto que 69 (66,3%) animais possuíam, no mínimo, um órgão/fluido com presença de DNA leptospiral. Das 758 amostras de órgãos/fluidos dos tratos genital e urinário, em 519 (68,5%) amostras havia presença de DNA. Na análise das variáveis estatísticas de cada tipo de material biológico entre período seco e chuvoso, apenas no fluido vaginal houve diferença significativa entre as proporções (p <0,001), no qual o período seco se sobrepôs. Foi possível realizar o sequenciamento em nove amostras com 99% de similaridade à L. interrogans e isolamento em três amostras de fluido vaginal. E em três cultivos de fluido vaginal foram obtidos resultados positivos na PCR, indicando a recuperação de estirpes viáveis. No Capítulo II foi realizado um estudo para detectar a transmissão vertical de Leptospira sp. em fetos de ovinos abatidos no Semiárido Nordestino. Após abate das progenitoras, os conceptos foram retirados do ambiente uterino e conduzidos ao laboratório, onde foram necropsiados, Amostras de sangue das matrizes e dos fetos foram coletados para investigação da ocorrência de anticorpos anti-Leptospira sp. através da SAM. Para análise molecular através da PCR a partir dos conceptos, foram coletadas amostras do sistema nervoso central (SNC), pulmão, fígado, baço, conteúdo estomacal, líquido peritoneal, rim, bexiga, urina e sistema reprodutor e naqueles que estavam no início da formação, as amostras consistiram apenas em sistema nervoso central e macerado do tórax (ovóide córmico). Foram amostradas 23 progenitoras e destas, sete apresentaram anticorpos a partir do título 50. Em relação aos fetos, foram coletados 29, sendo dois (6,9%) soropositivos na titulação 10 para os sorogrupos Pyrogenes, Tarassovi e Autumnalis. Na PCR, 24 (82,7%) tiveram pelo menos um órgão positivo. De um total de 209 amostras, em 61 (29,2%) foi comprovada a presença de DNA leptospírico. O sequenciamento de DNA leptospírico foi possível em três amostras de fragmentos de rim, SNC e fígado com 99,3% similares a L. interrogans. Na análise macroscópica foram observados que três fetos possuíam múltiplas malformações.
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As amostras de melhores reações foram amplificadas e submetidas ao sequenciamento genético. Para o cultivo bacteriológico, apenas fluido vaginal e urina foram utilizados, enquanto o sangue foi destinado à investigação sorológica por meio do teste de aglutinação microscópica (SAM). No total, foram detectados anticorpos anti- Leptospira sp. em 26 (25%) dos animais analisados pela SAM na diluição inicial 1:50, enquanto que 69 (66,3%) animais possuíam, no mínimo, um órgão/fluido com presença de DNA leptospiral. Das 758 amostras de órgãos/fluidos dos tratos genital e urinário, em 519 (68,5%) amostras havia presença de DNA. Na análise das variáveis estatísticas de cada tipo de material biológico entre período seco e chuvoso, apenas no fluido vaginal houve diferença significativa entre as proporções (p <0,001), no qual o período seco se sobrepôs. Foi possível realizar o sequenciamento em nove amostras com 99% de similaridade à L. interrogans e isolamento em três amostras de fluido vaginal. E em três cultivos de fluido vaginal foram obtidos resultados positivos na PCR, indicando a recuperação de estirpes viáveis. No Capítulo II foi realizado um estudo para detectar a transmissão vertical de Leptospira sp. em fetos de ovinos abatidos no Semiárido Nordestino. Após abate das progenitoras, os conceptos foram retirados do ambiente uterino e conduzidos ao laboratório, onde foram necropsiados, Amostras de sangue das matrizes e dos fetos foram coletados para investigação da ocorrência de anticorpos anti-Leptospira sp. através da SAM. Para análise molecular através da PCR a partir dos conceptos, foram coletadas amostras do sistema nervoso central (SNC), pulmão, fígado, baço, conteúdo estomacal, líquido peritoneal, rim, bexiga, urina e sistema reprodutor e naqueles que estavam no início da formação, as amostras consistiram apenas em sistema nervoso central e macerado do tórax (ovóide córmico). Foram amostradas 23 progenitoras e destas, sete apresentaram anticorpos a partir do título 50. Em relação aos fetos, foram coletados 29, sendo dois (6,9%) soropositivos na titulação 10 para os sorogrupos Pyrogenes, Tarassovi e Autumnalis. Na PCR, 24 (82,7%) tiveram pelo menos um órgão positivo. De um total de 209 amostras, em 61 (29,2%) foi comprovada a presença de DNA leptospírico. O sequenciamento de DNA leptospírico foi possível em três amostras de fragmentos de rim, SNC e fígado com 99,3% similares a L. interrogans. Na análise macroscópica foram observados que três fetos possuíam múltiplas malformações.In regions with a semiarid climate, there are environmental factors that are adverse to the survival and spread of leptospires, so the role of peculiarities in transmission routes that are independent of the environment needs to be further investigated. Thus, it sought to generate contributions to the diagnosis and epidemiology of infection by Leptospira sp. in sheep reared in semiarid conditions. In Chapter I, a study was described of 104 adult female sheep sampled during the dry and rainy period, between the years 2018 and 2019. Samples of vaginal fluid, urine, bladder, kidney, uterus, uterine tube, ovary and placenta were collected in the slaughter line for subsequent molecular detection through the polymerase chain reaction (PCR). The samples with the best reactions were amplified and subjected to genetic sequencing. For bacteriological culture, only vaginal fluid and urine were used, while the blood was destined for serological investigation through the microscopic agglutination test (SAM). In total, anti- Leptospira sp. in 26 (25%) of the animals analyzed by SAM in the initial 1:50 dilution, while 69 (66.3%) animals had at least one organ/fluid with the presence of leptospiral DNA. Of the 758 samples of organs/fluids from the genital and urinary tracts, in 519 (68.5%) samples there was DNA. In the analysis of the statistical variables of each type of biological material between dry and rainy periods, only in the vaginal fluid had a significant difference between the proportions (p <0.001), in which the dry period overlapped. It was possible to perform the sequencing in nine samples with 99% similarity to L. interrogans and isolation in three samples of vaginal fluid. And in three cultures of vaginal fluid, positive results were obtained in PCR, indicating the recovery of viable strains. In Chapter II, a study was carried out to detect vertical transmission of Leptospira sp. in fetuses of sheep slaughtered in the Northeastern Semiarid. After slaughtering the progenitors, the fetuses were removed from the uterine environment and taken to the laboratory, where they were necropsied. Blood samples from the matrices and fetuses were collected to investigate the occurrence of anti-Leptospira sp. through SAM. For molecular analysis through PCR from the conceptuses, samples of the central nervous system (SNC), lung, liver, spleen, stomach contents, peritoneal fluid, kidney, bladder, urine and reproductive system were collected and from those who were at the beginning of formation , the samples consisted only of central nervous system and macerated chest (choroid ovoid). 23 progenitors were sampled and of these, seven showed antibodies from the title 50. Regarding the fetuses, 29 were collected, two (6.9%) of whom were seropositive in titration 10 for the serogroups Pyrogenes, Tarassovi and Autumnalis. In PCR, 24 (82.7%) had at least one positive organ. Of a total of 209 samples, 61 (29.2%) demonstrated the presence of leptospiric DNA. Leptospiric DNA sequencing was possible in three samples of kidney, CNS and liver fragments with 99.3% similar to L. interrogans. In macroscopic analysis, it was observed that three fetuses had multiple malformations.Submitted by Renata Cardoso (renaatachaves97@hotmail.com) on 2022-06-09T15:19:47Z No. of bitstreams: 1 DENISE BATISTA NOGUEIRA - DISSERTAÇÃO PPGCSA 2020.pdf: 913371 bytes, checksum: 6a730480e29548b68ad7ece6d661ba4d (MD5)Made available in DSpace on 2022-06-09T15:19:47Z (GMT). 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