Efeitos do Resveratrol associado ou não à proteína anticongelante (AFP) tipo I para a congelação de embriões ovinos produzidos in vivo

• Ano de defesa: 2026
• Autor(a) principal: Guimarães, Mariana Pedrosa de Paula
• Orientador(a): Fabjan, Joanna Maria Gonçalves De Souza
• Banca de defesa: Rodrigues, Ana Paula Ribeiro , Siqueira, Luiz Gustavo Bruno
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://app.uff.br/riuff/handle/1/44794
• topic: Antioxidante; Criobiologia; Crioprotetor; Embrião; MOTE; Ovino; Reprodução animal; Embrião de mamíferos; Resveratrol; Criobiologia; Proteínas anticongelantes; Antioxidant; Cryobiology; Cryoprotectant; Embryo; MOET

Avanços científicos na área da criobiologia vêm ocorrendo a fim de alcançar melhorias nas técnicas de criopreservação, minimizando as injúrias causadas pelas baixas temperaturas. Nessa conjectura, o presente estudo visou determinar o efeito da associação entre proteína anticongelante (AFP) tipo I e resveratrol na congelação lenta de embriões ovinos produzidos in vivo. Trinta e cinco ovelhas da raça Santa Inês foram submetidas à indução de estro, superovulação com posterior acasalamento e coleta de embriões. Os embriões recuperados foram classificados morfologicamente de acordo com o estágio de desenvolvimento e sua qualidade. Embriões de boa qualidade (GI e GII) foram aleatoriamente distribuídos em três grupos experimentais: AFP (adição de 0,1 µg/mL de AFP tipo I no meio de congelamento), RESV (préincubação em meio holding com 1 µM de resveratrol por 6 h) ou RESV + AFP (associação entre as condições descritas nos outros grupos). Os embriões selecionados foram submetidos às seguintes metodologias de acordo com cada grupo experimental: congelação lenta em meio suplementado com AFP I sem exposição prévia ao resveratrol (AFP); pré-exposição por 6 h em meio holding suplementado com resveratrol e congelação lenta em meio não suplementado com AFP I (RESV); e pré-exposição por 6 h em meio holding suplementado com resveratrol e congelação lenta em meio suplementado com AFP I (RESV + AFP). Os embriões congelados foram armazenados em botijão de nitrogênio líquido até a realização das análises. Após o descongelamento, os embriões foram cultivados in vitro em meio SOFaa, em incubadora a 38,5 °C, 5% CO2, 5% O2 e 90% N2 por 48 h. Foram realizadas análises das taxas de reexpansão (24 e 48 h) e eclosão (48 h após descongelamento), atividade mitocondrial, índice apoptótico, conteúdo intracelular de lipídeos e avaliação de estresse oxidativo, além de análise de expressão gênica por meio da técnica de RT-qPCR. Não houve diferença (P>0,05) na atividade mitocondrial antes e após a incubação ao resveratrol, ao passo que os níveis de glutationa (GSH), espécies reativas de oxigênio (EROs) e a razão entre eles (EROs/GSH) reduziram após 6 h de incubação com o antioxidante (P<0,05). Após o descongelamento, o grupo RESV + AFP apresentou os maiores níveis de atividade mitocondrial em comparação aos demais (P<0,05), momento em que também foi observada diferença nos níveis de EROs e na relação EROs/GSH (P<0,05). Após 48 h de cultivo in vitro, não foi evidenciada diferença entre os grupos nos parâmetros mencionados (P>0,05). Não houve diferença na sobrevivência pós cultivo, assim como nos índices apoptóticos entre os grupos (P>0,05), porém, o grupo RESV + AFP apresentou maior (P<0,05) concentração intracelular de lipídeos quando em comparação a RESV e AFP. Por fim, a expressão dos genes relacionados a viabilidade celular e metabolismo oxidativo, AQP3 e PRDX1, respectivamente, demonstrou-se up-regulada (P<0,05) no grupo RESV em comparação ao grupo AFP. Em conjunto, os resultados apontam para um desequilíbrio redox derivado da associação entre as moléculas, não demonstrando ser uma estratégia viável para a congelação lenta de embriões ovinos produzidos in vivo. No entanto, a exposição ao resveratrol por 6 h pré congelamento mostrou-se uma ferramenta para mitigação de EROs, possibilitando a manutenção do equilíbrio redox sem impactar na atividade mitocondrial embrionária.