Quantificação de triptofano em plasma por cromatografia líquida de alta eficiência eco-friendly

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2011
Autor(a) principal: Pinhati, Renata Romanholi lattes
Orientador(a): Raposo, Nádia Rezende Barbosa lattes
Banca de defesa: Brandão, Marcos Antônio Fernandes lattes, Brandão, Humberto de Mello lattes
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-graduação em Saúde Brasileira
Departamento: Faculdade de Medicina
País: Brasil
Palavras-chave em Português:
Área do conhecimento CNPq:
Link de acesso: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/4941
Resumo: O triptofano é um aminoácido essencial e precursor da síntese de serotonina (5-HT). Variações nos níveis plasmáticos de 5-HT estão relacionadas com alterações de humor, ansiedade, depressão, sono, fadiga e supressão de apetite. Neste estudo foi desenvolvido um método simples, rápido e sensível para a quantificação de triptofano em plasma e que emprega a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector diode array (DAD) no comprimento de onda fixo de 267 nm. A separação foi realizada em coluna analítica ACE 5 C18 (150 mm x 4,6 mm de diâmetro interno e tamanho da partícula de 5 µm), o tempo de corrida foi de 10 min. A fase móvel foi constituída por solução de acetato de sódio 5 mM e acetonitrila (92:8, v/v) e modo de eluição isocrática (1 mL min-1). A preparação da amostra consistiu na desproteinização do plasma utilizando ácido perclórico 8%. O triptofano foi caracterizado no tempo de retenção de 5 min. A especificidade foi monitorada utilizando matrizes normais, lipêmicas e hemolizadas, não sendo observado nenhum pico interferente no tempo de retenção do triptofano. A linearidade do método foi detectada entre 0,5 a 30,0 µg mL-1 e os coeficientes de variação do teste de precisão foram calculados intra e inter-dia para três concentrações (2,5; 5,0 e 15,0 µg mL-1) apresentando variações de 0,26 a 1,30% (intra-dia) e 3,07 a 3,97% (inter-dia) respectivamente. Exatidão e recuperação satisfatórias foram obtidas por este método, além de utilizar pequenas quantidades de solvente orgânico, caracterizando a técnica como eficiente e ecologicamente amigável.
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A separação foi realizada em coluna analítica ACE 5 C18 (150 mm x 4,6 mm de diâmetro interno e tamanho da partícula de 5 µm), o tempo de corrida foi de 10 min. A fase móvel foi constituída por solução de acetato de sódio 5 mM e acetonitrila (92:8, v/v) e modo de eluição isocrática (1 mL min-1). A preparação da amostra consistiu na desproteinização do plasma utilizando ácido perclórico 8%. O triptofano foi caracterizado no tempo de retenção de 5 min. A especificidade foi monitorada utilizando matrizes normais, lipêmicas e hemolizadas, não sendo observado nenhum pico interferente no tempo de retenção do triptofano. A linearidade do método foi detectada entre 0,5 a 30,0 µg mL-1 e os coeficientes de variação do teste de precisão foram calculados intra e inter-dia para três concentrações (2,5; 5,0 e 15,0 µg mL-1) apresentando variações de 0,26 a 1,30% (intra-dia) e 3,07 a 3,97% (inter-dia) respectivamente. Exatidão e recuperação satisfatórias foram obtidas por este método, além de utilizar pequenas quantidades de solvente orgânico, caracterizando a técnica como eficiente e ecologicamente amigável.Trytophan is an essential amino acid and a serotonin (5-HT) synthesis precursor. Altered plasma levels of 5-HT are related to humor and behavioral alterations, anxiety, depression, sleep, fatigue and appetite suppression. In this study, a simple, fast, sensitive and specific high-performance liquid chromatography (HPLC) method was developed for determination of tryptophan with diode array detection (DAD) setting at programmed wavelength (λ = 267 nm). The separation was carried out on an analytical column ACE 5 C18 (150 mm x 4.6 mm internal diameter, 5 μm particle size) in less than 10 min. Mobile phase consisted of 5 mM sodium acetate and acetonitrile (92:8, v/v), isocratically eluted (1 mL min-1). Sample preparation consisted of plasma deproteinization with 8% perchloric acid solution. Tryptophan was characterized by a retention time of 5 min. Specificity was monitored using lipemic and hemolysate plasma samples and any peak was observed at the same retention time of tryptophan. A linear range was detected from 0.5 to 30.0 µg mL-1 and coefficients of variation calculated from intra and inter-day from 3 concentration (2.5; 5.0 e 15.0 µg mL-1) assays precision were 0.26 – 1.30% and 3.07 – 3.97% respectively. Satisfactory accuracy and recovery were obtained by this method, and use small amounts of organic solvent, characterizing the technique as an efficient and eco-friendly.FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas GeraisporUniversidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)Programa de Pós-graduação em Saúde BrasileiraUFJFBrasilFaculdade de MedicinaCNPQ::CIENCIAS DA SAUDETriptofanoSerotoninaCromatografia líquidaTryptophanSerotoninLiquid chromatographyQuantificação de triptofano em plasma por cromatografia líquida de alta eficiência eco-friendlyinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFJFinstname:Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)instacron:UFJFTHUMBNAILrenataromanholipinhati.pdf.jpgrenataromanholipinhati.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1260https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/4941/4/renataromanholipinhati.pdf.jpgd84580335d61bbc1ca87fea5dcc3a64bMD54ORIGINALrenataromanholipinhati.pdfrenataromanholipinhati.pdfapplication/pdf1636769https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/4941/1/renataromanholipinhati.pdf2040ff1c86aef423fdd77a3ebd21b33dMD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82197https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/4941/2/license.txt000e18a5aee6ca21bb5811ddf55fc37bMD52TEXTrenataromanholipinhati.pdf.txtrenataromanholipinhati.pdf.txtExtracted texttext/plain98251https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/4941/3/renataromanholipinhati.pdf.txte75b4885ee7196d4293b8f425c456e40MD53ufjf/49412019-06-16 07:02:46.516oai:hermes.cpd.ufjf.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufjf.br/oai/requestopendoar:2019-06-16T10:02:46Repositório Institucional da UFJF - Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)false
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