Avaliação da atividade imunomodulatória in vitro do extrato bruto e de metabólitos secundários de Baccharis dracunculifolia (Asteraceae)

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2014
Autor(a) principal: Leal, Daisy Marizeth de Carvalho lattes
Orientador(a): Silva Filho, Ademar Alves da lattes
Banca de defesa: Castellano Filho, Didier Silveira lattes
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas
Departamento: Faculdade de Farmácia
País: Brasil
Palavras-chave em Português:
Área do conhecimento CNPq:
Link de acesso: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/8580
Resumo: As plantas são utilizadas há mais de 60.000 anos pelos seres humanos através da medicina popular. Baccharis dracunculifolia (Asteraceae) é uma espécie nativa do Brasil conhecida por ser a principal fonte botânica da própolis verde. A própolis verde é conhecida por suas propriedades antimicrobiana, anti-inflamatória e imunomodulatória. Devido à escassez de estudos sobre a ação da Baccharis dracunculifolia, no sistema imune, o presente trabalho teve como objetivo geral avaliar os efeitos do extrato bruto e frações da B. dracunculifolia bem como de metabólitos secundários sobre a produção de mediadores inflamatórios em sobrenadante de culturas celulares de esplenócitos de camundongos C57BL/6. Buscou-se produzir o extrato bruto e frações das partes aéreas da mesma e realizar o isolamento, a purificação e a identificação dos metabólitos secundários majoritários presentes nas partes aéreas da B. dracunculifolia. Após isto, avaliar os efeitos do extrato bruto das frações orgânicas e dos metabólitos secundários obtidos dessa espécie vegetal sobre os níveis das citocinas IL-17, IL-4, TNF-α, IFN- (por ELISA) e óxido nítrico (NO) (método de Griess) em esplenócitos de camundongos C57BL/6. O isolamento dos metabólitos foi realizado por meio de técnicas cromatográficas, os quais foram identificados pela espectroscopia de RMN de 1H. Nas análises dos espectros, tomou-se como base a comparação com dados da literatura o que permitiu identificar a estrutura do ácido (E)-4-(2,3-diidrocinamoiloxi) cinâmico, da ermanina e do beturetol. Nos ensaios para a avaliação in vitro da atividade imunomodulatória, concluiu-se que o NO sofreu inibição tanto do extrato bruto quanto da fração clorofórmica nas duas maiores concentrações testadas (100 μg/mL e 50 μg/mL). Já a fração hexânica e a aquosa inibiram somente na maior concentração testada (100 μg/mL). Os metabólitos isolados foram capazes de inibir a produção de NO também na concentração de (100 μg/ml). Os resultados obtidos na avaliação das citocinas IL-4, IL17, INF- e TNF-α mostraram que o extrato bruto foi capaz de inibir a produção de IL-4, IL-17 e TNF-α nas três concentrações testadas (100 μg/mL; 50 μg/mL; 25 μg/mL) e IFN- nas duas maiores concentrações (100 μg/mL; 50 μg/mL). A fração clorofórmica inibiu a produção de IL-4, IFN- e TNF-α nas três concentrações testadas (100 μg/mL; 50 μg/mL; 25 μg/mL) e IL-17 somente na maior concentração (100 μg/mL). A fração hexânica foi capaz de inibir todas as citocinas apenas na maior concentração (100 μg/mL). Já a fração aquosa inibiu apenas IL-17 na maior concentração (100 μg/mL). A substância (E)-4-(2,3-diidrocinamoiloxi) cinâmico mostrou-se ativa nas duas maiores concentrações (100 μg/mL; 50 μg/mL) frente à IL-4, IFN- e TNF-α. Já a substância beturetol inibiu a produção de IL-4 e IL-17 (100 μg/mL; 50 μg/mL) e IFN- e TNF-α (100 μg/mL). A substância ermanina inibiu a produção de IL-4 e IFN- apenas na maior concentração testada (100 μg/mL). A fração clorofórmica se mostrou a mais ativa das frações testadas. Conclui-se que o estudo comprovou o efeito imunomodulatório da espécie frente aos mediadores inflamatórios analisados e novos estudos devem ser realizados para elucidar o potencial imunomodulatório da Baccharis dracunculifolia.
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Devido à escassez de estudos sobre a ação da Baccharis dracunculifolia, no sistema imune, o presente trabalho teve como objetivo geral avaliar os efeitos do extrato bruto e frações da B. dracunculifolia bem como de metabólitos secundários sobre a produção de mediadores inflamatórios em sobrenadante de culturas celulares de esplenócitos de camundongos C57BL/6. Buscou-se produzir o extrato bruto e frações das partes aéreas da mesma e realizar o isolamento, a purificação e a identificação dos metabólitos secundários majoritários presentes nas partes aéreas da B. dracunculifolia. Após isto, avaliar os efeitos do extrato bruto das frações orgânicas e dos metabólitos secundários obtidos dessa espécie vegetal sobre os níveis das citocinas IL-17, IL-4, TNF-α, IFN- (por ELISA) e óxido nítrico (NO) (método de Griess) em esplenócitos de camundongos C57BL/6. O isolamento dos metabólitos foi realizado por meio de técnicas cromatográficas, os quais foram identificados pela espectroscopia de RMN de 1H. Nas análises dos espectros, tomou-se como base a comparação com dados da literatura o que permitiu identificar a estrutura do ácido (E)-4-(2,3-diidrocinamoiloxi) cinâmico, da ermanina e do beturetol. Nos ensaios para a avaliação in vitro da atividade imunomodulatória, concluiu-se que o NO sofreu inibição tanto do extrato bruto quanto da fração clorofórmica nas duas maiores concentrações testadas (100 μg/mL e 50 μg/mL). Já a fração hexânica e a aquosa inibiram somente na maior concentração testada (100 μg/mL). Os metabólitos isolados foram capazes de inibir a produção de NO também na concentração de (100 μg/ml). 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Due to the scarcity of studies on the action of Baccharis dracunculifolia in the immune system, the present work had as main objective to evaluate the effects of the crude extract and fractions of B. dracunculifolia and their secondary metabolites on the production of inflammatory mediators in supernatant of cell cultures of mice C57BL/6 splenocytes. Also sought to give the crude extract and fractions of its aerial parts, to perform the isolation, purification and identification of the major secondary metabolites present in B. dracunculifolia aerial parts and to evaluate the effects of the crude extract, organic fractions and secondary metabolites obtained from this plant species on the levels of IL-17, IL-4, TNF-α, IFN-γ cytokines (for ELISA) and nitric oxide (NO) (Griess method) in mice C57BL/6 splenocytes. The metabolites isolation was performed by chromatographic techniques which were identified by 1H NMR spectroscopy. In the spectra analysis, it was considering as a basis the data literature comparison, which allowed us to identify the structure of the acid (E)-4-(2,3- diidrocinamoiloxi) cinnamic, ermanina and beturetol. In tests for evaluating in vitro of immunomodulatory activity, it was concluded that NO has suffered inhibition of both the crude extract and the chloroform fraction in the two highest concentrations tested (100 μg/mL e 50 μg/mL). By another, the hexane and the aqueous fractions were inhibited only at the highest concentration tested (100 mg / mL). The isolated metabolites were also able to inhibit NO production in concentration (100 mg / ml). The results of IL-4, IL17, INF- e TNF-α cytokines evaluation have showed that crude extract was able to inhibit the IL-4, IL-17 and TNF-α production in all of three concentrations that were tested (100 μg/mL; 50 μg/mL; 25 μg/mL) and IFN-in the two highest tested concentrations (100 μg/mL; 50 μg/mL). The chloroform fraction has inhibited IL-4, IFN- e TNF-α production in three concentrations tested (100 μg/mL; 50 μg/mL; 25 μg/mL) and IL-17 only at the highest concentration (100 μg/mL). The hexane fraction was able to inhibit all cytokines only at the highest concentration (100 mg / mL). Since the aqueous fraction has inhibited only IL-17 at the highest concentration (100 mg / mL). The (E) -4 - (2,3-diidrocinamoiloxi) cinnamic substance has proved to be active at the two highest concentrations in the presence of IL-4, IFN- and TNF-α. Now, the beturetol substance has inhibited IL-4 and IL-17 (100 mg / mL, 50 mg / ml) and IFN-γ and TNF-α (100 g / ml) production. The ermanina substance has inhibited IL-4 and IFN-γ production only at the highest concentration tested (100 mg / mL). The chloroform fraction has showed to be the most active of the tested ones. It was concluded that the study demonstrated the immunomodulatory effect of the specie analyzed against inflammatory mediators and further studies should be conducted to elucidate Baccharis dracunculifolia immunomodulatory potential.porUniversidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)Programa de Pós-graduação em Ciências FarmacêuticasUFJFBrasilFaculdade de FarmáciaCNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIABaccharis dracunculifoliaPrópolis verdeAtividade imunomodulatóriaCitocinasBaccharis dracunculifoliaGreen própolisImmunomodulatory activityCytokineAvaliação da atividade imunomodulatória in vitro do extrato bruto e de metabólitos secundários de Baccharis dracunculifolia (Asteraceae)info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFJFinstname:Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)instacron:UFJFTEXTdaisymarizethcarvalholeal.pdf.txtdaisymarizethcarvalholeal.pdf.txtExtracted texttext/plain147114https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/8580/3/daisymarizethcarvalholeal.pdf.txt971137ddf25a166aceb366a03df42cb8MD53THUMBNAILdaisymarizethcarvalholeal.pdf.jpgdaisymarizethcarvalholeal.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1307https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/8580/4/daisymarizethcarvalholeal.pdf.jpg45e2b8a2d0e5e5546f307b6be1c9b7daMD54ORIGINALdaisymarizethcarvalholeal.pdfdaisymarizethcarvalholeal.pdfapplication/pdf1543034https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/8580/1/daisymarizethcarvalholeal.pdf617c899e0a32a40ab58382c94ce47a13MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82197https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/8580/2/license.txt000e18a5aee6ca21bb5811ddf55fc37bMD52ufjf/85802019-06-16 04:12:43.438oai:hermes.cpd.ufjf.br:ufjf/8580TElDRU7vv71BIERFIERJU1RSSUJVSe+/ve+/vU8gTu+/vU8tRVhDTFVTSVZBCgpDb20gYSBhcHJlc2VudGHvv73vv71vIGRlc3RhIGxpY2Vu77+9YSwgdm9j77+9IChvIGF1dG9yIChlcykgb3UgbyB0aXR1bGFyIGRvcyBkaXJlaXRvcyBkZSBhdXRvcikgY29uY2VkZSBhbyBSZXBvc2l077+9cmlvIApJbnN0aXR1Y2lvbmFsIGRhIFVuaXZlcnNpZGFkZSBGZWRlcmFsIGRlIEp1aXogZGUgRm9yYSBvIGRpcmVpdG8gbu+/vW8tZXhjbHVzaXZvIGRlIHJlcHJvZHV6aXIsIHRyYWR1emlyIChjb25mb3JtZSBkZWZpbmlkbyBhYmFpeG8pLCBlL291IGRpc3RyaWJ1aXIgYSBzdWEgcHVibGljYe+/ve+/vW8gKGluY2x1aW5kbyBvIHJlc3VtbykgcG9yIHRvZG8gbyBtdW5kbyBubyBmb3JtYXRvIGltcHJlc3NvIGUgZWxldHLvv71uaWNvIGUgZW0gcXVhbHF1ZXIgbWVpbywgaW5jbHVpbmRvIG9zIGZvcm1hdG9zIO+/vXVkaW8gb3Ugdu+/vWRlby4KClZvY++/vSBjb25jb3JkYSBxdWUgbyBSZXBvc2l077+9cmlvIEluc3RpdHVjaW9uYWwgZGEgVW5pdmVyc2lkYWRlIEZlZGVyYWwgZGUgSnVpeiBkZSBGb3JhIHBvZGUsIHNlbSBhbHRlcmFyIG8gY29udGXvv71kbywgdHJhbnNwb3IgYSBzdWEgcHVibGljYe+/ve+/vW8gcGFyYSBxdWFscXVlciBtZWlvIG91IGZvcm1hdG8gcGFyYSBmaW5zIGRlIHByZXNlcnZh77+977+9by4gVm9j77+9IHRhbWLvv71tIGNvbmNvcmRhIHF1ZSBvIFJlcG9zaXTvv71yaW8gSW5zdGl0dWNpb25hbCBkYSBVbml2ZXJzaWRhZGUgRmVkZXJhbCBkZSBKdWl6IGRlIEZvcmEgcG9kZSBtYW50ZXIgbWFpcyBkZSB1bWEgY++/vXBpYSBkZSBzdWEgcHVibGljYe+/ve+/vW8gcGFyYSBmaW5zIGRlIHNlZ3VyYW7vv71hLCBiYWNrLXVwIGUgcHJlc2VydmHvv73vv71vLiBWb2Pvv70gZGVjbGFyYSBxdWUgYSBzdWEgcHVibGljYe+/ve+/vW8g77+9IG9yaWdpbmFsIGUgcXVlIHZvY++/vSB0ZW0gbyBwb2RlciBkZSBjb25jZWRlciBvcyBkaXJlaXRvcyBjb250aWRvcyBuZXN0YSBsaWNlbu+/vWEuIFZvY++/vSB0YW1i77+9bSBkZWNsYXJhIHF1ZSBvIGRlcO+/vXNpdG8gZGEgc3VhIHB1YmxpY2Hvv73vv71vIG7vv71vLCBxdWUgc2VqYSBkZSBzZXUgY29uaGVjaW1lbnRvLCBpbmZyaW5nZSBkaXJlaXRvcyBhdXRvcmFpcyBkZSBuaW5nde+/vW0uCgpDYXNvIGEgc3VhIHB1YmxpY2Hvv73vv71vIGNvbnRlbmhhIG1hdGVyaWFsIHF1ZSB2b2Pvv70gbu+/vW8gcG9zc3VpIGEgdGl0dWxhcmlkYWRlIGRvcyBkaXJlaXRvcyBhdXRvcmFpcywgdm9j77+9IGRlY2xhcmEgcXVlIG9idGV2ZSBhIHBlcm1pc3Pvv71vIGlycmVzdHJpdGEgZG8gZGV0ZW50b3IgZG9zIGRpcmVpdG9zIGF1dG9yYWlzIHBhcmEgY29uY2VkZXIgYW8gUmVwb3NpdO+/vXJpbyBJbnN0aXR1Y2lvbmFsIGRhIFVuaXZlcnNpZGFkZSBGZWRlcmFsIGRlIEp1aXogZGUgRm9yYSBvcyBkaXJlaXRvcyBhcHJlc2VudGFkb3MgbmVzdGEgbGljZW7vv71hLCBlIHF1ZSBlc3NlIG1hdGVyaWFsIGRlIHByb3ByaWVkYWRlIGRlIHRlcmNlaXJvcyBlc3Tvv70gY2xhcmFtZW50ZSBpZGVudGlmaWNhZG8gZSByZWNvbmhlY2lkbyBubyB0ZXh0byBvdSBubyBjb250Ze+/vWRvIGRhIHB1YmxpY2Hvv73vv71vIG9yYSBkZXBvc2l0YWRhLgoKQ0FTTyBBIFBVQkxJQ0Hvv73vv71PIE9SQSBERVBPU0lUQURBIFRFTkhBIFNJRE8gUkVTVUxUQURPIERFIFVNIFBBVFJPQ++/vU5JTyBPVSBBUE9JTyBERSBVTUEgQUfvv71OQ0lBIERFIEZPTUVOVE8gT1UgT1VUUk8gT1JHQU5JU01PLCBWT0Pvv70gREVDTEFSQSBRVUUgUkVTUEVJVE9VIFRPRE9TIEUgUVVBSVNRVUVSIERJUkVJVE9TIERFIFJFVklT77+9TyBDT01PIFRBTULvv71NIEFTIERFTUFJUyBPQlJJR0Hvv73vv71FUyBFWElHSURBUyBQT1IgQ09OVFJBVE8gT1UgQUNPUkRPLgoKTyBSZXBvc2l077+9cmlvIEluc3RpdHVjaW9uYWwgZGEgVW5pdmVyc2lkYWRlIEZlZGVyYWwgZGUgSnVpeiBkZSBGb3JhIHNlIGNvbXByb21ldGUgYSBpZGVudGlmaWNhciBjbGFyYW1lbnRlIG8gc2V1IG5vbWUgKHMpIG91IG8ocykgbm9tZShzKSBkbyhzKSBkZXRlbnRvcihlcykgZG9zIGRpcmVpdG9zIGF1dG9yYWlzIGRhIHB1YmxpY2Hvv73vv71vLCBlIG7vv71vIGZhcu+/vSBxdWFscXVlciBhbHRlcmHvv73vv71vLCBhbO+/vW0gZGFxdWVsYXMgY29uY2VkaWRhcyBwb3IgZXN0YSBsaWNlbu+/vWEuCg==Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufjf.br/oai/requestopendoar:2019-06-16T07:12:43Repositório Institucional da UFJF - Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)false
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