Identificação do sexo em Astronotus ocellatus: aspectos comportamentais, hormonais e moleculares

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Carvalho, Aline Ferreira Souza de
• Orientador(a): Murgas, Luís David Solis
• Banca de defesa: Paula , Daniella Aparecida de Jesus, Pompeu, Paulo dos Santos, Peconick, Ana Paula, Machado, Gilmara Junqueira
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Lavras
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-graduação em Ciências Veterinárias
• Departamento: Departamento de Medicina Veterinária
• País: brasil
• Palavras-chave em Português: Andrógenos; Astronotus ocellatus - Diferenciação sexual; Expressão gênica; Androgynous; Astronotus ocellatus - Sex differentiation; Gene expression
• Área do conhecimento CNPq: Medicina Veterinária
• Link de acesso: https://repositorio.ufla.br/handle/1/12470

Objetivo avaliar diferentes métodos de sexgem para a identificação do sexo em Astronotus ocellatus, considerando aspectos comportamentais, hormonais e moleculares. No primeiro experimento, objetivou-se identificar o sexo em A. ocellatus adultos por avaliação do comportamento agressivo e perfil de esteroides sexuais. O comportamento agressivo foi avaliado pelo teste do espelho, quantificando-se latência, ataques específicos e ataques totais. A dosagem de testosterona (T) e 17β-estradiol (E 2) foram determinadas por meio do teste de ELISA. A análise histológica das gônadas foi realizada como padrão ouro de sexagem a fim de validar as técnicas propostas e determinar o estágio de maturação sexual. O Kappa de Cohen foi utilizado para avaliar a concordância entre os métodos de sexagem. Os testes t de Student ou Mann-Whitney foram aplicados para avaliar as possíveis diferenças no comportamento e perfil hormonal. Não foi possível identificar o sexo por meio da avaliação do comportamento agressivo. A determinação da relação T/E 2 possibilitou identificar o sexo com eficácia de 80,56% . Foram também observadas diferenças significativas (p<0,05) nos níveis de T e E 2 entre machos e fêmeas. No segundo experimento,objetivou-se avaliar os genes autossômicos Foxl2, Sox9 e Wt1a como possíveis candidatos para identificação do sexo em A. ocellatus. Para isso, foi realizada a caracterização molecular e a determinação do perfil de expressão gênica dos genes Foxl2, Sox9 e Wt1a na gônada de machos e fêmeas. Após eutanásia, coletou-se fragmentos de ovário (n=5) e testículos (n=5) de A. ocellatus adultos. Para caracterização molecular, extraiu-se o RNA procedendo-se à síntese do cDNA, sendo este utilizado para amplificação por PCR com primers específicos para os genes de interesse. Em seguida, os fragmentos de DNA foram purificados, clonados, sequenciados e analisados filogeneticamente. Para determinar o perfil de expressão gênica, foram desenvolvidos ensaios de RT-qPCR. Foi possível isolar e caracterizar sequências parciais de DNA dos genes Foxl2, Sox9 e Wt1a. A análise filogenética revelou estreita relação entre as sequências de aminoácidos dos genes de interesse em A. ocellatus e outras espécies de peixes teleósteos. Perfil de expressão marcadamente influenciado pelo sexo, sendo níveis de transcritos de Foxl2 (p=0,033) significativamente maiores no ovário em comparação ao testículo. Por outro lado, os níveis de transcritos para Sox9 e Wt1a foram significativamente maiores (p=0,020 e p=0,014) no testículo. Conclui-se que é possível identificar o sexo em A. ocellatus por meio da dosagem de esteroides sexuais. Além disso, os genes Foxl2, Sox9 e Wt1a podem ser utilizados como possíveis marcadores moleculares do sexo para a espécie em questão.