Vírus influenza recombinantes como vetores vacinais: desenvolvimento e aplicação no modelo de doença de chagas

• Ano de defesa: 2014
• Autor(a) principal: Rafael Polidoro Alves Barbosa
• Orientador(a): Ricardo Tostes Gazzinelli, Alexandre de Magalhães Vieira Machado
• Banca de defesa: Joao Trindade Marques, Flavio Guimaraes Fonseca, Joseli Lannes-vieira, Andrea Teixeira de Carvalho
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais
• Palavras-chave em Português: Influenza; Neuraminidase; Vírus recombinante; ASP2; Trypanosoma cruzi
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9UKHHU

As vacinas são consideradas uma das aplicações médicas mais bem sucedidas e eficazes na prevenção de doenças infecciosas. Há estimativas que até 3 milhões de vidas são salvas através de vacinação por ano, além de cem milhões de pessoas que deixam de ficar doentes reduzindo o impacto econômico e social causado por diversas doenças. Dentre as tecnologias mais viáveis para o desenvolvimento de novas vacinas se encontram os vírus recombinantes. Em 2010, nosso grupo demonstrou a viabilidade da construção e uso de vírus influenza recombinantes em combinação com adenovírus recombinantes contra a Toxoplasmose em camundongos. Uma importante doença negligenciada é a doença de Chagas. É causada pela infecção com o protozoário Trypanosoma cruzi e é prevalente na América Latina. Seu tratamento tem maior eficácia na fase aguda da doença, causando ainda efeitos adversos. Não há vacinas contra a doença de Chagas disponíveis para uso em humanos, portanto o estudo e desenvolvimento de um protocolo otimizado de vacinação se faz uma interessante e necessária linha de pesquisa. Usando a técnica genética reversa, geramos vírus influenza recombinantes carreando as porções C-terminal e medial da proteína ASP-2 de T. cruzi. Esses vírus recombinantes foram caracterizados genotipica e fenotipicamente. A imunização usando Influenza-ASP-2 como indução e Ad-ASP2 como reforço estimularam potente resposta CD8+ polifuncional e imunodominante capaz de proteger camundongos C57BL/6 e C3H/He desafiados com a cepa Y de T. cruzi. Entretanto, os vírus influenza-ASP-2 gerados retém virulência quando em dose maior que a vacinal. Assim, como uma estratégia de atenuar o vetor nós geramos vírus influenza deficientes em neuraminidase, vNA-, incapazes de sair das células infectadas. Confirmamos a atenuação através de curva de peso e mortalidade após inoculação intranasal de camundongos C57BL/6. Em seguida, demonstramos que tais vírus causam menor dano pulmonar e baixo infiltrado inflamatório. Importante ressaltar que os níveis de Vírus influenza recombinantes como vetores vacinais: desenvolvimento e aplicação no modelo de doença de Chagas| 10 citocinas pró-inflamatórias não estavam aumentadas nem nos pulmões nem no soro dos animais inoculados com vNA-. Estes vírus mantiveram a capacidade de induzir a produção de anticorpos neutralizantes, além de estimularem a resposta de linfócitos T CD8+ específica e de forma dose dependente, imunizando animais contra um desafio com o vírus selvagem. Demonstramos, por fim, que estes vírus são atenuados mesmo em camundongos severamente imunodeficientes em resposta imune inata (MyD88-/-) ou adaptativa (RAG-/-). Em conclusão, conseguimos gerar e caracterizar vírus influenza vivos recombinantes em combinação com adenovírus recombinantes capazes de induzir potente resposta celular e proteger camundongos contra infecção letal com Trypanosoma cruzi. Ademais, geramos vírus influenza atenuados para serem usados como vetores seguros. Caracterizamos estes vírus quanto ao seu perfil inflamatório e avaliamos sua capacidade de induzir resposta imune específica anti-viral e proteger os animais contra infecção letal com vírus influenza selvagem. Estes vírus também foram atenuados em animais imunodeficientes.