Desenvolvimento, caracterização físico-química e biológica de lipossomasaniônicos ph-sensíveis para o transporte de DNA

• Ano de defesa: 2006
• Autor(a) principal: Guilherme Diniz Tavares
• Orientador(a): Monica Cristina de Oliveira
• Banca de defesa: Vanessa Carla Furtado Mosqueira, Bernardo Ruegger Almeida Neves
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais
• Palavras-chave em Português: Transporte de dna; Lipossomas Aniônicos ph-sensíveis; Caracterização físico-química
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/LFSA-7TAJXQ

A terapia gênica representa uma nova e promissora modalidade naprática médica para o tratamento de doenças resultantes de alteraçõesmoleculares do DNA, tais como os diversos tipos de câncer e doençasdegenerativas. No entanto, a utilização de ácidos nucleicos neste tipo deterapia é limitada devido a sua baixa penetração no interior celular einstabilidade nos fluidos biológicos. Por isto, a utilização de carreadores é de extrema importância para o sucesso da mesma. O emprego de lipossomas catiônicos tem se mostrado satisfatório para a liberação intracelular de genes, porém estes podem apresentar o inconveniente de serem citotóxicos. Assim, a encapsulação do material genético em lipossomas aniônicos pH-sensíveis pode ser interessante como alternativa à toxicidade relatada. No presente trabalho, efetuou-se a complexação prévia do DNA plasmidial com um derivado catiônico da b-ciclodextrina (6-monodeoxi-6-monoamino-b-ciclodextrina). Destaforma, há uma neutralização da carga superficial do material genético, além de sua compactação, o que contribui para uma eficiente encapsulação no interior dos lipossomas aniônicos pH-sensíveis. Estes lipossomas foram avaliados quanto às suas características físico-químicas e à sua citotoxicidade empregando-se células CHO. Com a formação do complexo entre o DNA e a b- ciclodextrina catiônica (b-CD+) na razão de cargas igual a +/-, foi possível obter a menor quantidade de DNA livre. A quantidade de DNA encapsulada noslipossomas aniônicos pH-sensíveis foi de aproximadamente 10-14 mg/mL. O diâmetro médio e o potencial zeta destas vesículas lipídicas foi igual a 186,0 ± 7,5 nm e -56,0 ± 3,7 mV, respectivamente. Além disso, estas apresentaram uma maior homogeneidade na distribuição do tamanho quando comparadas à formulações sem o complexo b-CD+/DNA (índice de polidispersão = 0,20 ± 0,14 versus 0,11 ± 0,02, para os lipossomas brancos e para os lipossomas contendo o complexo â-CD+/DNA, respectivamente). Esta maior homogeneidade também foi observada através da análise morfológica dos lipossomas aniônicos pH-sensíveis por Microscopia de Força Atômica (AFM). Os lipossomas contendo o complexo â-CD+/DNA mostraram vesículasmais homogêneas e estáveis quando da sua deposição sobre a mica. Em contraste, os lipossomas brancos têm uma distribuição mais heterogênea, além de apresentarem, em alguns campos, estruturas achatadas dispostas sobre a mica em detrimento à morfologia esférica típica dos lipossomas. A citotoxicidade dos lipossomas aniônicos pH-sensíveis contendo o complexo â-CD+/DNA foi realizada in vitro com o emprego das células CHO e comparativamente a um tipo de lipossoma catiônico comercializado, Lipofectin®. Comparando-se os valores da viabilidade celular para ambas as formulações diluídas de 5 a 5.000.000 de vezes, percebe-se que não há diferença estatisticamente significativa entre estes valores e aqueles apresentados pelos grupos controle. Desta forma, pode-se supor que os lipossomas aniônicos pH-sensíveis contendo o complexo â-CD+/DNA podem apresentar segurança em relação à aplicação em protocolos de transfecção.