Papel dos receptores TRPA1 e TRPV1 em modelos de crises epilépticas

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Carla Ribeiro Álvares Batista
• Orientador(a): Antônio Carlos Pinheiro de Oliveira
• Banca de defesa: Antônio Lúcio Teixeira Júnior, Daniel de Castro Medeiros, Victor Rodrigues Santos, Juliana Carvalho Tavares
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais
• Programa de Pós-Graduação: Curso de Especialização em Ciências Biológicas - Fisiologia e Farmacologia
• Departamento: ICB - DEPARTAMENTO DE FARMACOLOGIA
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Epilepsia; Trpa1; Trpv1; pilocarpina; Pentilenotetrazol; Status epilepticus
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/34557

A epilepsia é um distúrbio neurológico que afeta milhões de pessoas em todo o mundo, enquanto a epilepsia do lobo temporal (ELT) responde por 40% de todos os casos de epilepsia, sendo a forma mais comum em adultos. A família de receptores de potencial transiente (TRP) é um grupo de canais catiônicos envolvidos em diferentes processos fisiológicos, como a homeostase iônica. O acúmulo de cálcio nos neurônios do hipocampo tem sido associado à etiologia da epilepsia, o que motiva o estudo da família TRP, cujos canais são altamente permeáveis a esse íon. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos dos bloqueadores TRPA1 e TRPV1 nas crises epilépticas, alterações histológicas e bioquímicas, além da liberação de glutamato e do conteúdo de cálcio citosólico em modelo de crise epiléptica induzida por pilocarpina ou pentilenotetrazol ou em preparações sinaptossomais de córtex. Para isso, animais C57Bl/6 (8-12 semanas de idade) receberam injeção intra-hipocampal de pilocarpina (40 μg), 30 minutos após a injeção intraperitoneal de bloqueador de TRPA1, TRPV1 ou veículo. Os bloqueadores do receptor TRPA1, AP18 (1, 3 e 10 mg/Kg) e do receptor TRPV1, SB366791 (0,1; 0,3 e 1 mg/Kg) foram utilizados nos experimentos in vivo. As concentrações de 0,1; 1; 10 e 30 μM foram usadas nas preparações de sinaptossomas para ambos os bloqueadores. Vinte e quatro horas após o status epilepticus (SE) induzido pela pilocarpina, os animais foram eutanasiados para a coleta dos tecidos cerebrais. Metade de seus cérebros foram removidos e processados para posteriores análises histológicas para avaliação de morte e viabilidade neuronal, marcação microglial e astrocitária. A outra metade dos cérebros dos animais foi removida para posterior análise de BDNF e dos níveis de citocinas, além da ativação da proteína quinase B (Akt) e da quinase regulada por sinal extracelular (Erk). As crises epilépticas induzidas pela pilocarpina foram avaliadas de acordo com a escala de Racine. Foi revelada forte associação entre AP18 e o desenvolvimento de SE, bem como o bloqueador e crises tônicoclônicas. O AP18 (3 mg/Kg) aumentou as crises classificadas como 3, 4 e 5. Por outro lado, o AP18 (10 mg/Kg) aumentou a latência mediana para os animais desenvolverem SE em relação ao grupo pilocarpina. A pilocarpina aumentou a marcação de neurônios em processo de degeneração evidenciada pela marcação por Fluoro-Jade C (FJC), sendo esta exacerbada pela administração de AP18 (1 e 3 mg/kg). De forma surpreendente, a droga induziu uma resposta dicotômica na microgliose induzida pela pilocarpina, pois exacerbou este parâmetro no giro denteado (GD) (3 mg/Kg) e reduziu em CA1 (1 e 3 mg/Kg). Observamos uma redução na reatividade astrocitária com AP18 (1 e 10 mg/Kg) induzida por pilocarpina, enquanto a dose de 3 mg/Kg de AP18 aumentou essa marcação no GD. Além disso, o AP18 reduziu os níveis de BDNF, TNF-α e CX3CL1 e aumentou os níveis de IL-10 comparado ao grupo pilocarpina. Em relação ao receptor TRPV1, foi observada forte associação entre SB366791 e o desenvolvimento do SE. A frequência de SE e convulsões tônico-clônicas no grupo SB366791 (0,1 e 0,3 mg/Kg) foi maior do que no grupo pilocarpina. A crise comportamental foi acompanhada por um aumento da morte neuronal. AP18 e SB366791 não alteraram nenhuma das análises com preparações de sinaptossomas corticais. Finalmente, nas crises induzidas por pentilenotetrazol, AP18 e SB366791 não alteraram a latência para o desenvolvimento de SE. O presente estudo mostrou que a administração sistêmica dos bloqueadores de TRPA1 e TRPV1, AP18 ou SB366791, respectivamente, aumentou a gravidade das crises epilépticas e danos neuronais decorrentes do SE induzido pela injeção intra-hipocampal de pilocarpina. Nossos resultados sugerem que AP18 e SB366791 apresentam efeitos pró-convulsivantes no modelo de pilocarpina, mas não de pentilenotetrazol. Estudos complementares nos ajudarão a caracterizar os mecanismos subjacentes desses canais na ELT.