Sequenciamento completo e estrutura cristalográfica da metaloprotease leucurolisina-a purificada do veneno de Bothrops leucurus

• Ano de defesa: 2009
• Autor(a) principal: Rodrigo Novaes Ferreira
• Orientador(a): Adriano Monteiro de Castro Pimenta
• Banca de defesa: Gloria Regina Franco, Marcelo Matos Santoro, Ana Maria Moura da Silva
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais
• Palavras-chave em Português: Bioquímica e Imunologia
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-936HJ4

Leucurolisina-a (leuc-a) e uma metaloprotease de veneno de serpente (SVMP) de classe P-I presente no veneno de Bothrops leucurus. A leuc-a teve sua estrutura primaria completamente sequenciada, apresentando uma unica cadeia polipeptidica com 202 residuos de aminoacidos e alta similaridades com outras SVMPs de classe P-I ja descritas. A leuc-a, mesmo em altas concentracoes, nao provoca hemorragia, apresentando apenas atividade proteolitica em proteinas de matriz extracelular. Essa enzima foi cristalizada, pelo metodo de difusao de vapor, e dois conjuntos de dados de difracao de raios-x, um a 1,8 eoutro a 1,6 A, foram coletados. Os dados mostraram que os cristais pertencem ao grupo espacial P212121, com parametros de celula unitaria muito similares A estrutura cristalografica da leuc-a foi resolvida pelo metodo de substituicao molecular usando o modelo da metaloproteinase BaP1 (PDB code 1ND1) purificada do veneno da serpente Bothrops asper. O modelo da leuc-a, a 1,8 A de resolucao, foi refinado ate um Rfator final = 0,168 e Rlivre = 0,235. A estrutura apresenta o conservado motivo de ligacao ao zinco H142E143XXH146XXG149XXH152 assim como o motivo gmet turn h C164I165M166, caracteristico da superfamilia metzincina. Um atomo de zinco foi observado no sitio catalitico da enzima sendo estabilizado pelos NÃ2 dos tres aneis imidazolicos dos residuos de histidinas H142H146H152 e uma molecula de agua entre o espaco do atomo de zinco e a cadeia lateral do residuo E143. Um ion calcio tambem foi observado unido das extremidades N e C-terminais da estrutura. Esse atomo e estabilizado por duas moleculas de agua e cinco atomos presentes nas cadeias laterais de residuos conservados: o oxigenio da carbonila do residuo Glu9; os dois oxigenios do carboxilato do residuo Asp93, o oxigenio da carbonila do residuo Cys197 e o oxigenio da carboxamida do residuo Asn200. A leuc-a possui seis residuos de cisteina (Cys117-Cys197, Cys157-Cys164, and Cys159-Cys181) envolvidos na formacao de pontes dissulfeto. A resolucao de outro conjunto de dados, com 1,6 A de resolucao, apresentou uma densidade eletronica desconhecida no sitio catalitico da enzima. Esse ligante foi identificado, sintetizado e utilizado com sucesso em ensaios de inibicao da atividade proteolitica da leuc-a.