Estudo comparativo da detecção de Doença Residual Mínima pelas técnicas de imunofenotipagem por citometria de fluxo e reação em cadeia da polimerase, em crianças e adolescentes com diagnóstico de Leucemia Linfoide Aguda

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Juliana Maria Camargos Rocha
• Orientador(a): Benigna Maria de Oliveira
• Banca de defesa: Marcos Borato Viana, Camila Silva Peres Cancela, Jose Andres Yunes, Juliana Godoy Assumpção
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais
• Palavras-chave em Português: Doença Residual Mínima (DRM); TCR; rearranjos clonais de Ig; citometria de fluxo; Leucemia linfoide aguda da infância; reação em cadeia da polimerase (PCR)
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AY4F7V

Introdução: As estratégias atuais de tratamento da leucemia linfoide aguda (LLA) da infância resultam em remissão de longo prazo em cerca de 90% das crianças acometidas, entretanto a probabilidade de evolução para a cura é menor dentre os pacientes que apresentam recidiva da doença. São propostos sistemas de estratificação do risco de recidiva, através de fatores clínicos e biológicos, visando à oferta de tratamento eficaz aos pacientes classificados nos grupos de alto risco. A doença residual mínima (DRM) - persistência de células leucêmicas residuais em proporções submicroscópicas, verificada durante o tratamento - representa hoje o principal indicador prognóstico da LLA em crianças, podendo determinar a redefinição da quimioterapia iniciada. Os métodos laboratoriais atualmente recomendados para a detecção de DRM são a imunofenotipagem por citometria de fluxo (CF) e a análise de rearranjos clonais dos genes de Ig e TCR por reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (RQ-PCR). Ambos apresentam bom desempenho na detecção de células leucêmicas residuais, entretanto são onerosos, demandam pessoal qualificado para a sua realização e são restritos a centros especializados, especialmente a RQ-PCR. Objetivos: Comparar as análises de DRM por CF e PCR convencional, em amostras colhidas ao final das fases de indução da remissão (D35) e consolidação da remissão (D78), e correlacionar os dados obtidos com as principais características clínicas dos pacientes com LLA. Metodologia: A população de estudo foi constituída por 42 pacientes com diagnóstico recente de LLA (35 LLA B e 7 LLA T), admitidos no Hospital das Clínicas da UFMG (HC/UFMG) no período entre setembro de 2013 e dezembro de 2016, e tratados de acordo com o protocolo do Grupo Brasileiro de Tratamento das Leucemias Agudas da Infância (GBTLI LLA-2009). As amostras de medula óssea (MO) dos pacientes incluídos no estudo foram avaliadas ao diagnóstico por CF, para caracterização imunofenotípica dos blastos e, por PCR convencional, para detecção de rearranjos clonais dos genes de Ig e TCR. A DRM foi avaliada por CF nas amostras de MO colhidas nos dias 15, 35 e 78 do tratamento e, por PCR convencional, nas amostras dos pontos D35 e D78. Resultados: Foram realizadas 107 análises de DRM por CF e 63 por PCR convencional. Considerando o ponto de corte de 0,01% para definição de positividade, a DRM foi detectada por CF em 87,8%, 17,1% e 28% das amostras analisadas nos tempos D15, D35 e D78, respectivamente. Por PCR convencional, a DRM foi detectada em 13,2% e 12% das amostras analisadas nos tempos D35 e D78, respectivamente. Avaliações pareadas de DRM por CF e PCR convencional foram realizadas em 61/68 (89,7%) amostras de MO colhidas nos pontos D35 e D78. A taxa de concordância geral entre as duas metodologias foi de 88,5%, sendo maior nas análises do D35 (91,9%; Kappa: 0,62), em comparação com as análises do D78 (83,3%; Kappa: 0,52). Os resultados discordantes foram esclarecidos pela metodologia de RQ-PCR, que evidenciou quatro resultados falso-positivos da CF, um falso-negativo da CF e dois falso-negativos da PCR convencional. Em análise de associação envolvendo os fatores prognósticos, foi verificada associação significativa entre linhagem celular acometida e DRM por PCR convencional, nos dois pontos de avaliação (D35: p = 0,037; D78: p = 0,032), sendo maior a frequência de detecção de DRM na LLA-T. O tempo de seguimento clínico dos pacientes variou de 6 a 46 meses (mediana: 27 meses). A probabilidade estimada de sobrevida global (SGLO) aos 3,8 anos foi de 75,1% (± 9,9%) e a probabilidade estimada de sobrevida livre de eventos (SLE) foi de 50,5% (± 21,4%). Foram observadas maiores SGLO e SLE no grupo de pacientes com LLA-B, em comparação ao grupo de pacientes com LLA-T (p = 0,001 e p = 0,001, respectivamente), assim como no grupo de pacientes com contagem de leucócitos ao diagnóstico inferior a 50.000 cel/µL, se comparado ao grupo com leucometria igual ou superior a 50.000 cel/µL (p = 0,0001 e p = 0,00009, respectivamente). Conclusão: As metodologias de CF e PCR convencional apresentam resultados comparáveis na detecção de DRM na LLA infantil, em amostras colhidas em fases de regeneração medular. Constituem métodos acessíveis a regiões com recursos financeiros e tecnológicos restritos, podendo ser utilizadas de forma complementar, com o intuito de propiciar a monitorização do tratamento quimioterápico a um maior número de crianças com LLA. Maior tempo de seguimento e maior número de casos são necessários para que sejam obtidos resultados consistentes nas análises de sobrevida.