Purificação e caracterização de uma nova metaloprotease da serpente Bothrops moojeni Hoge, 1966(Squamata: Viperidae) com ação na agregação plaquetária

• Ano de defesa: 2011
• Autor(a) principal: Mayara Ribeiro de Queiroz
• Orientador(a): Fábio de Oliveira
• Banca de defesa: Leonilda Stanziola, Júnia de Oliveira Costa, Marcelo Emílio Beletti
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais
• Palavras-chave em Português: ¿-fibrinogenase e agregacao plaquetaria; Metaloprotease; Peçonha de Bothrops moojeni
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/EJAO-8JYPZH

As peconhas de serpentes contem uma mistura complexa de diferentes proteinas e peptideos biologicamente ativos. O presente estudo teve como objetivo avaliar as atividades proteoliticas e biologicas, assim como o efeito inibitorio sobre a agregacao plaquetaria de uma nova metaloprotease da peconha de Bothrops moojeni. A purificacao da enzima, denominada BmooMPa-II, foi realizada atraves de duas etapas cromatograficas (troca ionica em DEAE-Sephacel e exclusao molecular em Sephacryl S300). BmooMPa-II e uma proteina monomerica que apresenta uma massa molecular aparente de 25kDa em SDS-PAGE 14% em condicoes redutoras. A atividade fibrinogenolitica foi avaliada por SDS-PAGE 14%. Primeiramente, a BmooMPa-II clivou a cadeia Aa do fibrinogenio seguida pela cadeia Bb, mas nao apresentou efeitos sobre a cadeia y. A atividade fibrinogenolitica foi inibida pelo b-mercaptoetanol, EDTA e 1,10-fenantrolina. A faixa de temperatura e pH otimos para a atividade fibrinogenolitica foram de 30-50 C e pH=8, respectivamente. Os resultados indicam que essa proteina e provavelmente uma a-fibrinogenase e pertence a classe PI das SVMPs. A BmooMPa-II nao apresentou atividades hemorragica, coagulante ou anticoagulante. Alem disso, a BmooMPa-II nao induziu edema ou hiperalgesia significantes. As observacoes histologicas mostraram que a BmooMPa-II causou alteracoes morfologicas no figado, rins, pulmoes e musculo de camundongos Swiss. A enzima BmooMPa-II inibiu a agregacao plaquetaria induzida por ADP, colageno, ristocetina e epinefrina. Quando desnaturada por altas temperaturas, a BmooMPa-II apresentou acao mais rapida de inibicao da agregacao plaquetaria induzida por ADP. Por fim, nossos resultados sugerem o uso da BmooMPa-II como um potente inibidor da agregacao plaquetaria.