Avaliação do potencial de amostras clínicas de coleta não invasiva para o diagnóstico molecular da leishmaniose visceral canina por PCR

• Ano de defesa: 2012
• Autor(a) principal: Sidney de Almeida Ferreira
• Orientador(a): Maria Norma Melo
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais
• Palavras-chave em Português: Leishmania infantum; Diagnóstico; Leishmaniose visceral canina; PCR; Coletas não invasivas
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-8ZTJEG

O uso de procedimentos simples para coleta de amostras e a realização de um diagnóstico eficiente da leishmaniose visceral canina (LVC) são de grande relevância para auxiliar o controle desta grave doença. Com base nisso, avaliou-se o potencial de amostras clínicas de coleta não invasiva como os swabs conjuntival, nasal, oral e swab de pele orelha para o diagnóstico molecular da LVC, utilizando-se a reação em cadeia da polimerase convencional (PCR). Além disso, foram avaliadas as cargas parasitárias obtidas destas amostras e suas possíveis implicações, utilizando a PCR em tempo real (qPCR). Para isso, foram utilizados cães naturalmente infectados obtidos no Centro de Controle de Zoonoses de Belo Horizonte-MG. Dez cães saudáveis e livres de infecção foram adotados como grupo controle. As amostras destes animais foram coletadas em três momentos diferentes. Na primeira coleta, foram obtidos 80 cães que foram divididos em dois grupos de 40 indivíduos de acordo com a ausência (grupo 1) ou presença de sinais clínicos compatíveis com a LVC (grupo 2). Destes animais, foram coletados o swab conjuntival separadamente de cada ocular, aspirados de medula óssea, biópsia de pele de orelha e sangue periférico. Estas amostras foram submetidas à PCR-hibridização e à qPCR. Os resultados da PCR-hibridização para os grupos 1 e 2 foram respectivamente: conjuntiva direita, 77,5% e 95%; conjuntiva esquerda, 75% e 87,5%; pele de orelha, 45% e 75%; medula óssea, 50% e 77,5%; sangue periférico, 27,5% e 22,5%. As positividades da PCR-hibridização para o swab conjuntival foram equivalentes (p>0,05) ou superiores àquelas referentes às amostras de coleta invasiva (p<0,05). Os dados de qPCR revelaram que as cargas parasitárias cutâneas dos dois grupos de cães foram equivalentes (p>0,05) e mais altas em relação às demais amostras dentro de cada grupo (p<0,05). Os títulos de IgG antiLeishmania dos cães com manifestações clínicas foram superiores aos dos cães sem expressão clínica (p = 0,025). Correlações positivas e significativas foram detectadas entre os títulos de IgG total e a carga parasitária nos cães sem sinais clínicos apenas quando a medula óssea e a pele de orelha foram consideradas (p<0,05).A segunda e a terceira coletas envolveram 34 e 28 cães naturalmente infectados respectivamente, dos quais foram coletadas as mesmas amostras clínicas citadas anteriormente, com o acréscimo do swab nasal (n = 62). Para o diagnóstico qualitativo, todos os materiais coletados desses cães foram submetidos à PCR complexo Leishmania donovani específica (cPCR), exceto o sangue periférico. A positividade para o swab II nasal foi equivalente àquelas obtidas para as demais amostras, alcançando a frequência de 87% (54/62), (p>0,05). A carga parasitária estimada para o swab nasal foi equivalente àquela obtida com o swab conjuntival (p> 0,05) e inferior ao parasitismo na medula óssea e pele de orelha (p<0,05). Somente dos cães da terceira coleta (n = 28) foram obtidos os swabs oral e de pele de orelha, além das demais amostras clínicas já mencionadas. As positividades calculadas para a cPCR foram: 79% (22/28) para o swab oral e 43% (12/28) para o swab de pele de orelha. O resultado para swab oral foi equivalente àqueles das demais amostras clínicas (p>0,05) e superou apenas o dado referente ao swab de pele de orelha (p = 0,013). A carga parasitária no swab oral foi equivalente àquelas estimadas nos swabs conjuntival e nasal (p>0,05) e inferior em relação às outras amostras clínicas (p<0,05). Para o swab de pele de orelha não foi possível estimar a carga parasitária com a metodologia adotada. Em suma, as amostras clínicas obtidas com swab, exceto o swab de pele de orelha, apresentaram importante potencial para o diagnóstico molecular da LVC, pois superaram ou equivaleram-se às amostras de coleta invasiva. Destaque é dado ao swab conjuntival que apresentou bom desempenho para o diagnóstico de cães infectados sem sinais clínicos. As cargas parasitárias cutâneas igualmente altas nesses cães impõem um sério desafio para o controle da LVC em regiões endêmicas, dadas as dificuldades em se diagnosticar acuradamente cães infectados sem expressão clínica.