Varredura de uma biblioteca de cDNA da aranha Lasiodora sp utilizando-se de antisoro policlonal anti-veneno total e clonagem das seqüências codificantes para LTx1 e LTx3 no vetor de expressão bacteriano pET-11a.

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2005
Autor(a) principal: Vieira, André Luiz Gomes
Orientador(a): Castro, Ieso de Miranda
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Biologia molecular
Molecular biology
Aranha - veneno
Link de acesso: http://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/2593
Resumo: Venenos de aranhas são sistemas de multicomponentes que podem ser agrupados em 3 classes químicas principais: moléculas orgânicas de baixo peso molecular, peptídeos e proteínas de alto peso molecular. A grande maioria de toxinas de aranhas identificadas até o momento é composta de polipeptídeos com uma massa molecular de 3000-8000 Da altamente reticulados por pontes dissulfeto. A purificação de peptídeos tóxicos de venenos de aranhas nos propicia um arsenal de ferramentas moleculares para estudos eletrofisiológicos, farmacológicos e estudo de canais iônicos. Este trabalho descreve o resultado da varredura de uma biblioteca de cDNA, utilizando-se da técnica de ELISA, com o objetivo de identificar proteínas imunogênicas. A biblioteca de cDNA foi construída a partir do mRNA isolado de glândulas de veneno de Lasiodora sp. Anti-soro contra o veneno total foi usado na varredura. Os clones positivos foram caracterizados por seqüenciamento de DNA. Nossos resultados mostram que os precursores das toxinas descritas apresentam um peptídeo sinal caracterizado por um alto conteúdo de aminoácidos hidrofóbicos, um propeptídeo interposto entre a seqüência sinal e a toxina madura, e a seqüência de aminoácidos da toxina madura. Os cDNAs que codificam as toxinas LTx1 e LTx3 foram inseridos no vetor de expressão pET-11a, gerando plasmídeos com a capacidade de codificar as toxinas maduras. O sistema pET-11a-LTx1 produziu a toxina LTx1 recombinante na forma solúvel.
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A purificação de peptídeos tóxicos de venenos de aranhas nos propicia um arsenal de ferramentas moleculares para estudos eletrofisiológicos, farmacológicos e estudo de canais iônicos. Este trabalho descreve o resultado da varredura de uma biblioteca de cDNA, utilizando-se da técnica de ELISA, com o objetivo de identificar proteínas imunogênicas. A biblioteca de cDNA foi construída a partir do mRNA isolado de glândulas de veneno de Lasiodora sp. Anti-soro contra o veneno total foi usado na varredura. Os clones positivos foram caracterizados por seqüenciamento de DNA. Nossos resultados mostram que os precursores das toxinas descritas apresentam um peptídeo sinal caracterizado por um alto conteúdo de aminoácidos hidrofóbicos, um propeptídeo interposto entre a seqüência sinal e a toxina madura, e a seqüência de aminoácidos da toxina madura. Os cDNAs que codificam as toxinas LTx1 e LTx3 foram inseridos no vetor de expressão pET-11a, gerando plasmídeos com a capacidade de codificar as toxinas maduras. O sistema pET-11a-LTx1 produziu a toxina LTx1 recombinante na forma solúvel.Spider venoms are multicomponent systems that can be grouped into three major chemical classes: low molecular mass organic molecules, polypeptides and high molecular mass protein. The vast majority of spider toxins identified up to date are polypeptides with a molecular mass of 3000-8000 Da, highly reticulated by disulfide bridges. Purification of peptides toxins from spider venoms gives an arsenal of molecular tools for electrophysiological, pharmacological and structural studies of ion channels. The present work describes the results of a screening carried out using ELISA and a cDNA expression library for identification of immunogenic proteins. The cDNA library was previously constructed with mRNA isolated from Lasiodora sp venom glands. Antibodies against the whole venom were used in this screening. Positive clones were characterized by DNA sequencing. The sequences revealed that the precursors of proteins contain signal peptides characterized by a very hydrophobic core, an intervening propeptide region, and the mature toxin. The cDNAs encoding the LTx1 and LTx3 toxins were inserted into the expression vector pET-11a, generating plasmids with coding capacity for mature toxins. The recombinant toxin LTx1 was found primarily in soluble fraction of the host cell.Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.Biologia molecularMolecular biologyAranha - venenoVarredura de uma biblioteca de cDNA da aranha Lasiodora sp utilizando-se de antisoro policlonal anti-veneno total e clonagem das seqüências codificantes para LTx1 e LTx3 no vetor de expressão bacteriano pET-11a.info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFOPinstname:Universidade Federal de Ouro Preto (UFOP)instacron:UFOPinfo:eu-repo/semantics/openAccessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81748http://www.repositorio.ufop.br/bitstream/123456789/2593/2/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD52ORIGINALDISSERTAÇÃO_VarreduraBibliotecaCDNA.PDFDISSERTAÇÃO_VarreduraBibliotecaCDNA.PDFapplication/pdf3155853http://www.repositorio.ufop.br/bitstream/123456789/2593/1/DISSERTA%c3%87%c3%83O_VarreduraBibliotecaCDNA.PDF34aba81a8805191ea66b3e509da8f9c5MD51123456789/25932019-03-28 14:33:05.354oai:localhost: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Repositório InstitucionalPUBhttp://www.repositorio.ufop.br/oai/requestrepositorio@ufop.edu.bropendoar:32332019-03-28T18:33:05Repositório Institucional da UFOP - Universidade Federal de Ouro Preto (UFOP)false
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