Deleção de genes de resistência à antibióticos em fibroblastos por crispr/cas9 para a produção de caprinos transgênicos para lactoferrina humana

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2021
Autor(a) principal: Silva, Gabriela Maciel
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Lactoferrina
Genética
Mortalidade infantil
Link de acesso: https://biblioteca.sophia.com.br/terminalri/9575/acervo/detalhe/127537
Resumo: O sistema CRISPR/Cas9 se tornou uma ferramenta muito utilizada devido a sua simplicidade e baixo custo quando comparada a outras ferramentas para edição genômica. O gene da Lactoferrina humana foi inserido no DNA de caprinos transgênicos juntamente com a resistência ao antibiótico neomicina. O objetivo do presente projeto foi remover o gene de resistência a antibiótico a partir do genoma dos caprinos transgênicos utilizando o sistema CRISPR/Cas9. Foram utilizadas CRISPR/Cas9 com a menor possibilidade de off-targets, flanqueando a região onde está inserido o cassete de resistência. Fibroblastos transgênicos foram transfectados com CRISPR/Cas9 (UP1 e DOWN3). Os fibroblastos transfectados foram selecionadas por diluição e, após a marcação de prováveis colônias puras, foram enviados para realização do diagnóstico por PCR para identificação da deleção desejada. Foi realizado o plaqueamento celular em 10 placas de 96 poços, a partir das quais foram testadas 96 colônias prováveis colônias puras. O sistema CRISPR/Cas9 desenhado nesse estudo para a remoção do gene de resistência à neomicina não se mostrou eficiente diante da não identificação do evento de deleção desejado a partir das colônias de fibroblastos analisadas por PCR. Palavras-chaves: CRISPR/Cas9; Edição Gênica; Lactoferrina Humana.
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