Baculovírus: produção in vitro do bioinseticida anticarsia e construção de vetor de expressão para glicoproteína (GPV) do rabies lyssavirus

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Andrade, Adrielly Silva Albuquerque de
• Orientador(a): Sousa, Adna Cristina Barbosa de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso embargado
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal da Paraíba
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
• Departamento: Biotecnologia
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Baculovírus; AgMNPV; Produção in vitro; Bioinseticida; Vetor de expressão; Baculoviruses; Production in vitro; Bioinsecticide; Expression Vector
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS
• Link de acesso: https://repositorio.ufpb.br/jspui/handle/123456789/19420

Os baculovírus são excelentes agentes no controle da população de insetos na natureza e, por isso, têm sido utilizados com sucesso como bioinseticida viral na agricultura. Ademais, graças ao conhecimento do processo de infecção in vitro em células hospedeiras, os baculovírus também são utilizados como vetores de expressão de proteínas recombinantes. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo produzir in vitro baculovírus selvagem e recombinante em células de inseto para futura aplicação como bioinseticida viral e expressão de proteínas recombinantes. Para isto, foram utilizadas as células IPLB-SF21 adaptadas ao cultivo em suspensão nos processos de infecção pelo vírus extracelular do Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) de primeira (P1), segunda (P2) e terceira passagem (P3). As variáveis analisadas foram crescimento e viabilidade celular, consumo de substrato e produtividade viral das diferentes passagens dos inóculos virais nos processos de infecção. Os dados obtidos foram utilizados para determinação dos parâmetros cinéticos: Velocidade específica de crescimento (µx); Consumo de substrato (qS) e; Produção de corpos de oclusão (qOB). Assim, foi constatado que as células controle apresentaram um µx igual a 0,570 d-1 e as células infectadas apresentaram velocidades de infecção de 0,204 d-1 (P1), 0,131 d-1 (P2) e 0,335 d-1 (P3), indicando que o baculovírus reduziu o crescimento de células infectadas quando comparadas as células controle. Quanto a qOB, obteve-se 0,93 OB(mL.d-1), 0,70 OB(mL.d-1) e 1,34 OB(mL.d-1) para P1, P2 e P3, respectivamente, e percebe-se que é diretamente proporcional à concentração de células viáveis infectadas. Com base nessas velocidades, pôdese calcular o rendimento na produção de poliedros por miligrama de glicose, 1,18x106 OB.mg- 1, 0,85x106 OB.mg-1 e 2,55x106 OB.mg-1, demonstrando a importância dos parâmetros cinéticos quando se deseja comparar a produtividade entre os sistemas e garantir um melhor rendimento do bioinseticida viral. Para a construção do vetor de expressão, o RNA total obtido a partir do tecido cerebral de camundongos infectados com o R. lyssavirus inativado foi utilizado para a construção do cDNA e clonagem em células competentes de E.coli. O DNA plasmidial foi extraído, mas houve uma baixa amplificação do gene da glicoproteína.