Estudos funcionais e biofísicos de uma fosfolipase A2 isolada da peçonha da serpente Bothrops alternatus

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Eulálio, Micaela de Melo Cordeiro
• Orientador(a): Salvador, Daniela Priscila Marchi
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal da Paraíba
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular
• Departamento: Biologia Celular e Molecular
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Urutu cruzeiro; Efeito coagulante; Atividade oxidante; Ação catalítica; PLA2 ácida; Coagulant effect; Oxidizing activity; Catalytic action; Acidic PLA2
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL
• Link de acesso: https://repositorio.ufpb.br/jspui/handle/123456789/20744

Serpentes do gênero Bothrops são de grande interesse científico, médico e social no Brasil, pois são responsáveis pelo maior número dos acidentes ofídicos que ocorrem no país. As toxinas isoladas de peçonhas ofídicas apresentam diversas atividades biológicas e são classificadas em diferentes classes, sendo uma delas as fosfolipases A2 (PLA2), que podem causar uma variedade de alterações fisiológicas ao serem inoculadas em organismos. Este estudo objetivou isolar, caracterizar e avaliar as funções biológicas de uma PLA2 (BaltAc-PLA2) da peçonha bruta da serpente Bothrops alternatus, conhecida popularmente como urutu-cruzeiro. A purificação dessa toxina foi realizada usando dois passos de cromatografia líquida (troca iônica e fase reversa). Com o intuito de verificar a pureza das amostras obtidas nos experimentos de cromatografia líquida, géis de poliacrilamida (SDS-PAGE) à 12% (m/v) foram realizados. Ensaios de Espectrometria de Massas, Espectroscopia do Dicroísmo Circular e Espalhamento de Luz Dinâmico foram realizados para a caracterização físico-química da toxina isolada. A ação catalítica da toxina foi avaliada espectrofotometricamente utilizando o substrato Diheptanoil Tio-PC e de modo indireto, com eritrócitos e gema de ovo. Além disso, foram avaliados três potenciais inibidores: varespladib, suramina e ácido rosmarínico. O potencial efeito oxidante da BaltAc-PLA2 sobre soluções de hemoglobinas (SolHb) foi realizado utilizando leitor de microplacas (Multiskan GO), nos comprimentos de ondas de 540 e 630 nm. Para avaliar a atividade coagulante, leituras foram feitas com a utilização do equipamento Coagmaster 2.0 (Wama). BaltAc-PLA2 é uma proteína de caráter ácido e cataliticamente ativa, com uma massa molecular aproximada de 14 kDa estimada por SDS-PAGE. As análises dos fragmentos de íons por MS/MS mostraram uma sequência de aminoácidos do sítio catalítico CCFVHDCCYGK, apresentando homologia com várias PLA2 de caráter ácido presentes nas peçonhas de serpentes do gênero Bothrops. Estudos estruturais utilizando esta PLA2 podem auxiliar no desenvolvimento de novos agentes terapêuticos, por possuir potencial científico e tecnológico elevado.