Pinças ópticas e pontos quânticos para avaliação de propriedades elétricas e biomecânicas eritrocitárias: aplicações em β Talassemia Intermediária
| Ano de defesa: | 2018 |
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| Tipo de documento: | Dissertação |
| Tipo de acesso: | Acesso aberto |
| Idioma: | por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Federal de Pernambuco
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| Programa de Pós-Graduação: |
Programa de Pos Graduacao em Engenharia Biomedica
|
| Departamento: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
Brasil
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| Palavras-chave em Português: | |
| Link de acesso: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/32824 |
Resumo: | Ferramentas fotônicas, como a pinça óptica (PO) e os pontos quânticos (PQs), vêm sendo cada vez mais utilizadas na área biomédica com o principal objetivo de extrair informações essenciais ao funcionamento celular. A PO é uma ferramenta que utiliza um laser no infravermelho próximo fortemente focalizado e, através da transferência de momento dos fótons, é capaz de exercer uma força suficiente para capturar, manipular, quantificar parâmetros físicos e correlacionar propriedades físicas/químicas de sistemas biológicos, sem qualquer contato mecânico. Por outro lado, os PQs são nanocristais fluorescentes de semicondutores que apresentam excepcional resistência à fotodegradação e superfície ativa para interação biológica. Nesse trabalho, a PO e os PQs foram explorados para caracterizar as propriedades biomecânicas e as cargas elétricas de membrana de eritrócitos. Para tanto inicialmente padronizou-se uma metodologia para determinar a elasticidade e a viscosidade da membrana eritrocitária a partir de um único experimento. A elasticidade foi obtida através da análise da deformação sofrida por eritrócitos capturados e arrastados pelo plasma sanguíneo em função da velocidade. Já a viscosidade da membrana foi determinada correlacionando-se a elongação eritrocitária com o tempo para o qual essas células levam para retornar à sua conformação original, depois de terem sido arrastadas pelo fluido. Adicionalmente, uma metodologia utilizando PQs catiônicos também foi avaliada para analisar a carga elétrica de membrana desses mesmos eritrócitos através de citometria de fluxo. Para isso, PQs de CdTe com emissão verde estabilizados com cisteamina foram sintetizados e caracterizados opticamente. As propriedades biomecânicas e elétricas são parâmetros fundamentais para o desempenho e a sobrevivência dos eritrócitos na microcirculação. Assim, nesse trabalho também foram estudadas células de β talassemia intermediária (Hbβ). Os resultados indicaram que os eritrócitos Hbβ são significativamente menos elásticos, com a membrana mais viscosa e apresentam carga elétrica membranar reduzida em relação aos normais. Ademais foram desenvolvidas metodologias para a mensuração de propriedades reológicas/elétricas, utilizando a PO e os PQs, eficientes, sensíveis e capazes de propiciar comparações entre eritrócitos normais com aqueles que sofreram modificações por problemas patológicos, tais como os Hbβ. Quantificar propriedades biomecânicas e elétricas eritrocitárias é essencial para entender as alterações fisiológicas e contribuir para avanços terapêuticos para essas doenças. |
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Nesse trabalho, a PO e os PQs foram explorados para caracterizar as propriedades biomecânicas e as cargas elétricas de membrana de eritrócitos. Para tanto inicialmente padronizou-se uma metodologia para determinar a elasticidade e a viscosidade da membrana eritrocitária a partir de um único experimento. A elasticidade foi obtida através da análise da deformação sofrida por eritrócitos capturados e arrastados pelo plasma sanguíneo em função da velocidade. Já a viscosidade da membrana foi determinada correlacionando-se a elongação eritrocitária com o tempo para o qual essas células levam para retornar à sua conformação original, depois de terem sido arrastadas pelo fluido. Adicionalmente, uma metodologia utilizando PQs catiônicos também foi avaliada para analisar a carga elétrica de membrana desses mesmos eritrócitos através de citometria de fluxo. Para isso, PQs de CdTe com emissão verde estabilizados com cisteamina foram sintetizados e caracterizados opticamente. As propriedades biomecânicas e elétricas são parâmetros fundamentais para o desempenho e a sobrevivência dos eritrócitos na microcirculação. Assim, nesse trabalho também foram estudadas células de β talassemia intermediária (Hbβ). Os resultados indicaram que os eritrócitos Hbβ são significativamente menos elásticos, com a membrana mais viscosa e apresentam carga elétrica membranar reduzida em relação aos normais. Ademais foram desenvolvidas metodologias para a mensuração de propriedades reológicas/elétricas, utilizando a PO e os PQs, eficientes, sensíveis e capazes de propiciar comparações entre eritrócitos normais com aqueles que sofreram modificações por problemas patológicos, tais como os Hbβ. Quantificar propriedades biomecânicas e elétricas eritrocitárias é essencial para entender as alterações fisiológicas e contribuir para avanços terapêuticos para essas doenças.FACEPEPhotonic tools such as the optical tweezer (OT) and quantum dots (QDs) have been increasingly used in the biomedical area. These tools aim to extract essential information necessary to the cellular operation. The OT is a tool that uses a highly focused near infrared laser beam and, through photon momentum transfer, exerts a force sufficient to capture, manipulate, quantify physical parameters, and correlate physical/chemical properties of biological systems, without any contact mechanical. On the other hand, QDs are fluorescent semiconductor nanocrystals that have exceptional resistance to photodegradation and an active surface for biological interaction. Herein, the OT and QDs were explored to characterize biomechanical properties and membrane electrical charges of erythrocyte. To do so, initially, a methodology to determine, in a single experiment, the elasticity and the membrane viscosity of erythrocytes was developed. The elasticity was obtained by analyzing deformations suffered by erythrocytes captured and dragged by blood plasma as a function of velocity. On the other hand, the membrane viscosity was determined by correlating the erythrocyte elongation with the time that this cell takes to return to its original conformation, after being dragged through the fluid. Additionally, a methodology using cationic QDs was also evaluated to analyze the membrane electrical charges of these same erythrocytes through flow cytometry. For this, cysteamine stabilized green emitting CdTe QDs were synthesized and optically characterized. Biomechanical and electrical properties are fundamental parameters for the performance and survival of erythrocytes in the microcirculation. Thus, we also studied β thalassemia intermedia cells (Hbβ). Results indicated that Hbβ erythrocytes are significantly less elastic, with the membrane more viscous and present a considerable reduction in membrane electrical charges when compared to the normal ones. Moreover, the methodologies here developed to measure the rheological/electrical properties, by using OT and QDs, showed to be efficient, sensitive and able to provide comparisons between normal erythrocytes and those that were modified by pathological problems, such as Hbβ. Quantifying biomechanical and electrical properties of erythrocytes is essential for understanding physiological changes and contributing to therapeutic advances for these diseases.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Engenharia BiomedicaUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessEngenharia BiomédicaHemoglobinopatiaElasticidadeViscosidadeCarga elétrica da membranaEritrócitosPinças ópticas e pontos quânticos para avaliação de propriedades elétricas e biomecânicas eritrocitárias: aplicações em β Talassemia Intermediáriainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPETHUMBNAILDISSERTAÇÃO Yandilla Suellen dos Santos da Silva.pdf.jpgDISSERTAÇÃO Yandilla Suellen dos Santos da Silva.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1180https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/32824/5/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Yandilla%20Suellen%20dos%20Santos%20da%20Silva.pdf.jpg077a090ff5fd28661d4202b064ba2fc5MD55ORIGINALDISSERTAÇÃO Yandilla Suellen dos Santos da Silva.pdfDISSERTAÇÃO Yandilla Suellen dos Santos da Silva.pdfapplication/pdf4588349https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/32824/1/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Yandilla%20Suellen%20dos%20Santos%20da%20Silva.pdf5b42266186a7a9d5e4ebc60a3fa09860MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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