Bioprospecção de Trichoderma spp. isolados do ecótono Caatinga-Cerrado piauiense como produtores de frutosiltransferase e purificação da enzima por sistema de duas fases aquosas

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: ARAUJO, Vinicius Breno Silva de
• Orientador(a): BRANDÃO, Romero Marcos Pedrosa
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Pernambuco
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pos Graduacao em Biologia Aplicada a Saude
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Fungos; Ecótono Caatinga-Cerrado; Frutosiltransferase; Frutooligossacarídeos
• Link de acesso: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/68193

A região de transição entre a Caatinga e o Cerrado, conhecida como ecótono, constitui um ambiente de grande biodiversidade, apresentando condições ideais para estudos de bioprospecção. Dentre os gêneros fúngicos, o gênero Trichoderma ganha destaque devido à sua versatilidade metabólica, sendo amplamente utilizado na produção de enzimas hidrolíticas, que possuem relevância na indústria alimentícia, farmacêutica e agrícola. Esses fungos também possuem a habilidade de sintetizar frutooligossacarídeos (FOS), compostos prebióticos obtidos por meio da ação de frutosiltransferases por uma via metabólica sustentável e com capacidade de ser produzida em larga escala. Porém para garantir a eficácia e grau de segurança dessas biomoléculas, técnicas de purificação são essenciais. Foram utilizadas 8 linhagens de Trichoderma spp., isoladas do solo no ecótono Caatinga-Cerrado no Piauí, Brasil. As cepas foram reativadas em meio BDA e incubadas a 30 °C por 7 dias. Para selecionar a melhor produtora de frutosiltransferase, empregou-se um meio de cultivo composto por extrato de levedura, Na₂HPO₄ e sacarose filtrada, e inoculado com 10⁴ esporos/mL. A fermentação ocorreu a 30 °C, 120 rpm, por 72 horas, seguida de filtração a vácuo para extração do líquido metabólico. A purificação foi realizada pelo Sistema de Duas Fases Aquosas (SDFA), utilizando PEG e fosfato de sódio, com planejamento fatorial 2⁴. O extrato bruto foi submetido ao Sistema de Duas Fases Aquosas (SDFA), com 19 ensaios realizados. A frutosiltransferase apresentou maior atividade na fase rica em sal. A interação entre massa molar do PEG, concentração de sal e pH influenciou significativamente no coeficiente de partição (K), com PEGs de maior massa molar, reduzindo a distribuição para a fase rica em PEG. A enzima apresentou pH ótimo de 3 (126,91 U/mol/min) e temperatura ideal de 60°C (60,26 U/mol/min). Íons como cálcio aumentaram a atividade em 115%, enquanto magnésio e sódio reduziram em 22% e 45%, respectivamente. Outros pHs e temperaturas não mostraram atividades significativas.