Avaliação in vitro do efeito imunomodulador do leite materno de camundongos infectados pelo Schistosoma mansoni

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: Sales, Iana Rafaela Fernandes
• Orientador(a): Souza, Valdênia Maria Oliveira de
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Pernambuco
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pos Graduacao em Medicina Tropical
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Esquistossomose; Leite humano; Imunidade celular; Peptídeos; Schistosomiasis; Human milk; Cellular immunity; Peptides
• Link de acesso: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/16506

A alta prevalência de esquistossomose crônica em gestantes, bem como em mulheres em idade fértil, tem sido amplamente relatada. Esta condição materna é capaz de alterar a resposta imune do descendente em longo prazo. O presente estudo teve o objetivo de avaliar o efeito in vitro do leite materno de mães infectadas pelo Schistosoma mansoni em esplenócitos e caracterizar os peptídeos encontrados nesse leite. Para isso, camundongos fêmeas infectadas ou não, tiveram seu leite coletado no 12º dia após o parto. Os esplenócitos jovens (15 dias) e maduros (6 semanas) foram cultivados com o Leite de Mães Infectadas (LMI) e com Leite de Mães Não Infectadas (LMNI) na presença de estimulador policlonal. Além disso, foram utilizados controles experimentais: Células pulsadas na ausência (BASAL) e apenas com estimulador policlonal (MITÓGENO) e células cultivadas com LMNI adicionado de antígenos solúveis dos ovos do S.mansoni (LMNI+SEA). Posteriormente, os ensaios de citometria de fluxo foram realizados para dupla marcação: Linfócitos T (CD3+ ou CD4+) marcados com CD28, CD154, CTLA4, IL-10 ou FoxP3. Além disso, foram analisadas a expressão de CD80, CD86 e CD40 na superfície de Macrófagos (CD14) e Linfócitos B (CD45R), e ainda a expressão de IL-10 por esse último. Para a análise dos peptídeos presentes no leite materno, um gel unidimensional foi confeccionado e as bandas obtidas no LMI, LMNI+SEA e LMNI foram processados para análise por espectometria de massa. Além disso, foram realizadas análises de antígenos parasitários: SEA e SWAP (antígeno solúvel do verme adulto). Esplenócitos jovens pulsados apenas com o mitógeno apresentaram maior frequência de células CD3+CD28+ e CD45R+IL10+. A adição de LMNI manteve aumento CD3+CD28+ e levou a menor frequência de Tregs, com aumento na expressão de células CD45R+CD40+. Ao ser introduzido o SEA (LMNI+SEA) foi identificada uma menor frequência de células CD3+CD28+ e aumento na expressão de IL-10. O LMI proporcionou menor frequência de linfócitos CTLA4+ e FoxP3+, porém com produção de IL-10 e maior frequência de CD45R+/CD80+. Para os esplenócitos maduros, o LMNI e LMI levaram à menor frequência de células CD3+/CD28+ e maior CD3+/CTLA4+, respectivamente, com aumento sustentado de Treg. Contudo, o LMI diminui a presença de células B IL-10+. A adição do SEA ao LMNI manteve a diminuição de células CD3+CD28+, mas aumentou a frequência de células CD3+/CD154+. O leite de mães esquistossomóticas apresentou peptídeos relacionados à presença do S. mansoni e com variabilidade de função. Destacamos a natureza imunomodulatória dos peptídios aqui identificados (Interleucina 17F, Glutationa s Transferase) que podem atuar na imunidade, seja para antígenos do parasita ou heterólogos, no descendente previamente amamentado. Estes achados enfatizam o caráter dicotômico do leite materno: estimulador em células jovens e tolerogênico em células maduras. Esses achados são relevantes em áreas endêmicas para esquistossomose e reiteram a importância da identificação e caracterização de antígenos parasitários, bem como, uma avaliação do seu papel na interação parasito-hospedeiro no incio da vida.