Detecção de NTPase de Toxoplasma gondii através de anticorpo monoclonal purificado por sistema de duas fases aquosas PEG / Fosfato.

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2005
Autor(a) principal: SILVA, Silvana de Fátima Ferreira da
Orientador(a): LIMA FILHO, José Luiz de
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Federal de Pernambuco
Programa de Pós-Graduação: Programa de Pos Graduacao em Ciencias Biologicas
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Brasil
Palavras-chave em Português:
Toxoplasmose
Testes imunológicos
Anticorpos monoclonais
Link de acesso: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/26230
Resumo: SILVA, Silvana de Fátima Ferreira da, também é conhecida em citações bibliográficas por: FERREIRA, Silvana
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spelling SILVA, Silvana de Fátima Ferreira dahttp://lattes.cnpq.br/2689883591362147http://lattes.cnpq.br/2834403735297272LIMA FILHO, José Luiz deKOBAYASHI, Masashi2018-09-05T19:01:09Z2018-09-05T19:01:09Z2005-06-27https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/26230SILVA, Silvana de Fátima Ferreira da, também é conhecida em citações bibliográficas por: FERREIRA, SilvanaA toxoplasmose é uma zoonose de larga distribuição mundial, causada pelo Toxoplasma gondii, protozoário intracelular obrigatório. Uma vez o indivíduo infectado, o parasito se mantém latente por vários anos, pois o rápido avanço da imunidade humoral e celular restringe eficientemente a ação patogênica do parasito. Entretanto, a imaturidade do sistema imune (como em fetos e recém-nascidos) ou a sua deficiência (no caso dos indivíduos imunodeprimidos) pode causar séria morbidade ou mortalidade. A parasitose apresenta uma variedade de sinais e sintomas clínicos, e o diagnóstico laboratorial torna-se uma ferramenta de importância fundamental. O emprego de uma metodologia diagnóstica que consiga discernir entre infecção latente e ativa é o principal meio para diminuir os danos provocados pelo parasita. O presente trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de uma estratégia diagnóstica na tentativa de elucidar a fase da doença. Para alcançar esse objetivo foi desenvolvido um ensaio sorológico enzimático (enzyme-linked immunosorbent assay – ELISA) utilizando anticorpo monoclonal da classe IgA (mab-IgA - monoclonal antibodies IgA) contra a enzima Nucleosil Trifosfato Hidrolase (NTPase), produzida por taquizoítos de Toxoplasma gondii (forma ativa do parasito). Para desenvolvimento do método, o mab-IgA foi produzido por expansão celular e purificado por meio de sistema de duas fases aquosa: polietileno glicol e fosfato (SDFA: PEG-Fosfato). O anticorpo purificado foi fixado em placas de ELISA e testado frente a soros de indivíduos na fase ativa da infecção, apresentando a forma ocular da doença, diagnosticados clinicamente por meio de fundoscopia. Os resultados revelaram uma concordância entre o teste desenvolvido e o diagnóstico clínico, apresentando especificidade de 86,30% e sensibilidade de 85,18%, com eficiência de 0,89 revelando a capacidade do método em identificar infecção ativa. Diante dos resultados, o presente estudo sugere a possibilidade da utilização de anticorpo monoclonal anti-NTPase de Toxoplasma gondii como marcador de fase ativa.Toxoplasmosis is a worldwide spread zoonotic disease caused by Toxoplasma gondii, an obligate intracellular protozoan. Once an individual is infected, the parasite remains latent for several years, since the fast advance of humoral and cellular immunity effectively restrains the parasite’s pathogenic action. However, an immature immune system (as in fetuses and newborns) or its deficiency (as is the case of immunocompromised individuals) may cause serious morbidity or mortality. The parasitosis presents a variety of clinical signs and symptoms, and laboratory diagnosis becomes a fundamental tool. The use of a diagnostic methodology capable to distinguish between latent and active infection is the main means to reduce the damages caused by the parasite. The objective of this study was to develop a diagnostic strategy in an attempt to elucidate the stage of the disease. To achieve that goal, an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed using an IgA-class monoclonal antibody against the Nucleosil Triphosphate Hydrolase enzyme (NTPase), produced by Toxoplasma gondii tachyzoites (the parasite’s active form). To develop the method, an IgA monoclonal antibody was produced by cell expansion and purified by means of an aqueous two-phase system: polyethylene glycol and phosphate (ATPS: PEG/Phosphate). The purified antibody was fixed on ELISA plates and tested against sera from individuals in the active phase of the infection, presenting the ocular form of the disease, clinically diagnosed by ophtalmoscopy. The results showed conformity between the developed test and the clinical diagnosis, presenting specificity of 86.30% and sensitivity of 85.18%, with an efficiency of 0.89 revealing the method’s capability to identify active infections. In view of these results, the present study suggests the possibility of using Toxoplasma gondii’s anti-NTPase monoclonal antibody as an active phase marker.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Ciencias BiologicasUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessToxoplasmoseTestes imunológicosAnticorpos monoclonaisDetecção de NTPase de Toxoplasma gondii através de anticorpo monoclonal purificado por sistema de duas fases aquosas PEG / Fosfato.info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisdoutoradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPETHUMBNAILTESE Silvana de Fátima Ferreira da Silva.pdf.jpgTESE Silvana de Fátima Ferreira da Silva.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1216https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/26230/6/TESE%20Silvana%20de%20F%c3%a1tima%20Ferreira%20da%20Silva.pdf.jpgb3a7a33e12adf29e0363f2e1ba239136MD56ORIGINALTESE Silvana de Fátima Ferreira da Silva.pdfTESE Silvana de Fátima Ferreira da Silva.pdfapplication/pdf1951264https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/26230/1/TESE%20Silvana%20de%20F%c3%a1tima%20Ferreira%20da%20Silva.pdfa74e449927a46092c45afce0bc99d7ebMD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; 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