Avaliação das atividades biológicas e imunomoduladora de crataBL encapsulada em lipossomas

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2018
Autor(a) principal: CAMPOS, Luís André de Almeida
Orientador(a): MAGALHÃES, Nereide Stela Santos
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Federal de Pernambuco
Programa de Pós-Graduação: Programa de Pos Graduacao em Biologia Aplicada a Saude
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Brasil
Palavras-chave em Português:
Doenças parasitárias
Lectinas
Link de acesso: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/32885
Resumo: MAGALHÃES, Nereide Stela Santos, também é conhecido(a) em citações bibliográficas por: SANTOS-MAGALHÃES, Nereide Stela
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spelling CAMPOS, Luís André de Almeidahttp://lattes.cnpq.br/3574609640969039http://lattes.cnpq.br/1063790618901917MAGALHÃES, Nereide Stela SantosCAVALCANTI, Isabella Macário Ferro2019-09-13T21:47:40Z2019-09-13T21:47:40Z2018-02-21https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/32885MAGALHÃES, Nereide Stela Santos, também é conhecido(a) em citações bibliográficas por: SANTOS-MAGALHÃES, Nereide StelaO objetivo deste estudo foi desenvolver e avaliar a citotoxicidade, atividade tripanocida, antibacteriana, antibiofilme e imunomoduladora da CrataBL encapsulada em lipossomas. Os lipossomas contendo CrataBL (CrataBL-Lipo) foram preparados pelo método de hidratação do filme lipídico seguido de ciclos de congelamento e descongelamento e sonicação. Eles foram caracterizados quanto ao tamanho de partícula, índice de polidispersão, potencial zeta, pH e taxa de encapsulação. A citotoxicidade de CrataBL e CrataBL-Lipo foi avaliada em linhagens celulares de fibroblastos L929 e macrófagos J774A.1 e os resultados foram expressos na concentração capaz de inibir 50% da viabilidade celular (CC₅₀). A atividade tripanocida de CrataBL e CrataBL-Lipo foi determinada utilizando tripomastigotas obtidos a partir de cultura celular infectada e os resultados foram expressos na concentração capaz de inibir 50% da viabilidade celular do parasito (IC₅₀). O mecanismo de indução da morte dos tripomastigotas após o tratamento com CrataBL-Lipo foi avaliado utilizando a técnica de citometria de fluxo. A atividade imunomoduladora de CrataBL-Lipo foi avaliada em macrófagos J774A.1 e as citocinas foram quantificadas utilizando o kit de mouse CBA Th1/Th2/Th17. A atividade antibacteriana de CrataBL e CrataBL-Lipo frente a Staphylococcus aureus sensível à meticilina (MSSA), Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) e Staphylococcus aureus resistente à vancomicina (VRSA) foi determinada através do método de microdiluição em caldo de acordo com o Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) para estabelecer a concentração inibitória mínima (CIM). A atividade antibiofilme de CrataBL e CrataBL-Lipo foi avaliada utilizando o método de coloração por cristal violeta em concentrações subinibitórias (CIM/2 e CIM/4). Os lipossomas contendo CrataBL apresentaram tamanho de partícula de 101,9 ± 1,3 nm, índice de polidispersão de 0,245, potencial zeta de +33,8 ± 1,3 mV, pH 7,41 e eficiência de encapsulação de 80 ± 0,84%. A CrataBL apresentou citotoxicidade apenas para fibroblastos L929 (CC₅₀ = 56,8 μg/ml), enquanto que CrataBL-Lipo não exibiu citotoxicidade nas linhas celulares de macrófagos J774A.1 e de fibroblastos L929 (CC₅₀ > 100 μg/ml). CrataBL não exibiu atividade tripanocida, porém CrataBLLipo apresentou IC₅₀ de 1,1 μg/ml com índice de seletividade maior que 90,9. CrataBL-Lipo induziu a morte celular do parasito através da apoptose tardia e necrose. CrataBL-Lipo apresentou atividade imunomoduladora com redução da 10 síntese de IL-10 e TNF-α. CrataBL não exibiu atividade antibacteriana (CIM > 0,72 mg/ml), porém CrataBL-Lipo apresentou CIM variando de 0,56 a 0,72 mg/ml frente a MSSA, MRSA e VRSA. CrataBL apresentou atividade antibiofilme em concentrações subinibitórias inibindo de 38,8% a 55,4% a formação de biofilme e reduzindo de 2,5% a 19,8% o biofilme préformado de MSSA, MRSA e VRSA, enquanto que CrataBL-Lipo apresentou maiores porcentagens de inibição da formação do biofilme (45,4% a 75,6%) e redução do biofilme préformado (12,1% a 69,2%). Os resultados obtidos neste estudo sugerem que CrataBL encapsulada em lipossomas é promissora para infecções causadas por Trypanosoma cruzi, MSSA, MRSA e VRSA, bem como apresenta potencial imunomodulador.FACEPEThe aim of this study was to develop and evaluate cytotoxicity, trypanocidal, antibacterial, antibiofilm and immunomodulatory activity of CrataBL encapsulated in liposomes. CrataBL-containing liposomes (CrataBL-Lipo) were prepared by the lipid film hydration method followed by freeze-thaw cycles and sonication, and characterized for particle size, polydispersity index, zeta potential, pH and encapsulation efficiency. Cytotoxicity of CrataBL and CrataBL-Lipo was evaluated against L929 fibroblast and J774A.1 macrophages and the results were expressed as the concentration able to inhibit 50% of cell viability (CC₅₀). Trypanocidal activity of CrataBL and CrataBL-Lipo was assessed using trypomastigotes obtained from infected cell culture and the results were expressed as the concentration able to inhibit 50% of cell viability 50% of the parasite cell viability (IC₅₀). The mechanism of induction of death of trypomastigotes after the treatment with CrataBL-Lipo was evaluated by flow cytometry technique. Immunodulation activity of CrataBL-Lipo was evaluated in J774A.1 macrophages and the cytokines were quantified using the CBA Th1/Th2/Th17 mouse kit. The antibacterial activity of CrataBL and CrataBL-Lipo against methicillin-sensitive Staphylococcus aureus (MSSA) and methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and vancomycin-resistant Staphylococcus aureus (VRSA) was determined by the broth microdilution method according to the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) to establish the minimum inhibitory concentration (MIC). The activity of CrataBL and CrataBL-Lipo for inhibition of biofilm formation and eradication of preformed biofilm was evaluated using the violet crystal staining method at subinhibitory concentrations (MIC/2 and MIC/4). CrataBL-Lipo showed particle size of 101.9 ± 1.3 nm, polydispersity index of 0.245, zeta potential of +33.8 ± 1.3 mV, pH 7.41 and encapsulation efficiency of 80 ± 0.84%. CrataBL showed cytotoxicity only against L929 fibroblast cell line (CC₅₀ = 56.8 μg/ml), whereas CrataBL-Lipo did not exhibit cytotoxicity in the J774A.1 macrophages and L929 fibroblast cell lines (CC₅₀ > 100 μg/ml). CrataBL did not exhibit trypanocidal activity, whereas CrataBL-Lipo showed IC₅₀ of 1.1 μg/ml with selectivity index higher than 90.9. CrataBL-Lipo induced cell death of the parasite through later apoptosis and necrosis. CrataBL-Lipo presented immunomodulatory activity with reduced synthesis of IL-10 and TNF-α. CrataBL did not exhibit antibacterial activity, whereas CrataBL-Lipo presented MIC from 0.56 to 0.72 mg/ml against MSSA, MRSA and VRSA. CrataBL presented antibiofilm activity at subinhibitory concentrations inhibiting biofilm formation from 38.8% to 55.4% and reducing the preformed biofilm from 2.5% to 19.8% of MSSA, MRSA and VRSA, whereas CrataBL-Lipo presented higher percentage of inhibition of biofilm formation (45.4% to 75.6%) and reduction of preformed biofilm (12.1% to 69.2%). The results obtained in this study suggest that CrataBL encapsulated into liposome is promising for infections caused by Trypanosoma cruzi, MSSA, MRSA and VRSA, as well as it has a potential immunomodulatory activity.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Biologia Aplicada a SaudeUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessDoenças parasitáriasLectinasAvaliação das atividades biológicas e imunomoduladora de crataBL encapsulada em lipossomasinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPETHUMBNAILDISSERTAÇÃO Luís André de Almeida Campos.pdf.jpgDISSERTAÇÃO Luís André de Almeida Campos.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1246https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/32885/5/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Lu%c3%ads%20Andr%c3%a9%20de%20Almeida%20Campos.pdf.jpg16182d17d2ee6e4528595d4bcbc58327MD55ORIGINALDISSERTAÇÃO Luís André de Almeida Campos.pdfDISSERTAÇÃO Luís André de Almeida Campos.pdfapplication/pdf2743825https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/32885/1/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Lu%c3%ads%20Andr%c3%a9%20de%20Almeida%20Campos.pdf74e259530dcd8623c2a7d1fbb9fa19f4MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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