Avaliação funcional de motivos da proteína de ligação à POLI-A 1 (PABP1) na interação com parceiros em Leishmania infantum
Ano de defesa: | 2022 |
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Programa de Pos Graduacao em Genetica
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Palavras-chave em Português: | |
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Resumo: | Protozoários patogênicos do gênero Leishmania apresentam o controle de expressão gênica predominantemente pós-transcricional, onde proteínas de ligação ao RNA parecem atuar, como a proteína de ligação à cauda poli-A (PABP). Três PABPs homólogas foram descritas em Leishmania, estruturadas em uma região N-terminal com motivos de reconhecimento ao RNA (RRMs), uma região de ligação (linker) e um domínio MLLE de ligação a peptídeos. Pretendendo ampliar a compreensão de papéis da PABP1 na iniciação da tradução, o estudo objetivou identificar regiões associadas à essencialidade e interações importantes. A PABP1 associa-se a mRNAs específicos e ao complexo eIF4F constituído por EIF4E4 e EIF4G3. Motivos nos RRMs 1 e 2, na região de ligação e no domínio MLLE foram mutagenizados previamente e determinados como importantes para a função da PABP1. Nesse trabalho, mutantes nos RRMs 3 e 4 foram gerados e avaliados quanto aos potenciais em complementar a ausência da PABP1 nativa em Leishmania infantum, onde o MLN (RRM4) foi incapaz de compensar esse efeito deletério. Para a PABP1, ensaios de co-precipitação e análises por espectrometria de massa indicaram interações com diferentes parceiros. Ensaios com as proteínas mutantes determinaram os motivos LMW (RRM2), MLN e TGM (MLLE) como essenciais na co-precipitação com EIF4G3, EIF4E4 e a quinase CRK3, respectivamente. Os resultados sugerem o motivo MLN como crítico para a atividade da proteína e o RRM12 como sítio de interação a componentes do eIF4F canônico. |
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Pretendendo ampliar a compreensão de papéis da PABP1 na iniciação da tradução, o estudo objetivou identificar regiões associadas à essencialidade e interações importantes. A PABP1 associa-se a mRNAs específicos e ao complexo eIF4F constituído por EIF4E4 e EIF4G3. Motivos nos RRMs 1 e 2, na região de ligação e no domínio MLLE foram mutagenizados previamente e determinados como importantes para a função da PABP1. Nesse trabalho, mutantes nos RRMs 3 e 4 foram gerados e avaliados quanto aos potenciais em complementar a ausência da PABP1 nativa em Leishmania infantum, onde o MLN (RRM4) foi incapaz de compensar esse efeito deletério. Para a PABP1, ensaios de co-precipitação e análises por espectrometria de massa indicaram interações com diferentes parceiros. Ensaios com as proteínas mutantes determinaram os motivos LMW (RRM2), MLN e TGM (MLLE) como essenciais na co-precipitação com EIF4G3, EIF4E4 e a quinase CRK3, respectivamente. Os resultados sugerem o motivo MLN como crítico para a atividade da proteína e o RRM12 como sítio de interação a componentes do eIF4F canônico.CNPqPathogenic protozoa of the genus Leishmania have their gene expression being controlled predominantly at post-transcriptional level, where different RNA binding proteins seem to act, such as the poly-A binding protein (PABP). Three PABP homologues have been described in Leishmania, with an N-terminal region containing four RNA recognition domains (RRMs), a linker region and a C-terminal MLLE domain. In order to expand the understanding of PABP1 roles in translation initiation, this study aimed to identify regions related to essentiality and important interactions. PABP1 associates with specific mRNAs and the eIF4F complex based on EIF4E4 and EIF4G3. Mutants in RRMs 1 and 2, in the linker region and in the MLLE domain were previously obtained and identified as important for PABP1 function. In this study, mutants in RRMs 3 and 4 were generated and evaluated for their potential to complement the absence of native PABP1 in Leishmania infantum, leading to the identification of the MLN motif in RRM4 as unable to compensate this deleterious effect. For PABP1, co-precipitation assays followed by mass spectrometry analysis allowed the definition of its interaction with different partners. New assays with the mutant proteins defined the LMW (RRM2), MLN and TGM (MLLE) motifs as essential for co-precipitation with EIF4G3, EIF4E4 and the CRK3 kinase, respectively. These results suggest the MLN motif as critical for protein activity and the RRM12 as an interaction site for eIF4F canonic components.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em GeneticaUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessProtozoárioLeishmaniaProteínas microbianasAvaliação funcional de motivos da proteína de ligação à POLI-A 1 (PABP1) na interação com parceiros em Leishmania infantuminfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPEORIGINALDISSERTAÇÃO Guilherme Santana Barbosa.pdfDISSERTAÇÃO Guilherme Santana Barbosa.pdfapplication/pdf10768434https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/44953/1/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Guilherme%20Santana%20Barbosa.pdf2d1c3b5771f82fc7a287eb8aca925bf8MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/44953/2/license_rdfe39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34MD52LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82142https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/44953/3/license.txt6928b9260b07fb2755249a5ca9903395MD53TEXTDISSERTAÇÃO Guilherme Santana Barbosa.pdf.txtDISSERTAÇÃO Guilherme Santana Barbosa.pdf.txtExtracted texttext/plain165207https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/44953/4/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Guilherme%20Santana%20Barbosa.pdf.txt2a1a26082df991b02910d188cd239842MD54THUMBNAILDISSERTAÇÃO Guilherme Santana Barbosa.pdf.jpgDISSERTAÇÃO Guilherme Santana Barbosa.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1192https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/44953/5/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Guilherme%20Santana%20Barbosa.pdf.jpg77090c7d2b0d955d16596636b6bce271MD55123456789/449532022-07-05 02:18:26.46oai:repositorio.ufpe.br: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ório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufpe.br/oai/requestattena@ufpe.bropendoar:22212022-07-05T05:18:26Repositório Institucional da UFPE - Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)false |
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