Isolamento e caracterização estrutural e biológica de fosfolipases ácidas da peçonha de cascavel (Crotalus durissus cascavella)

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2017
Autor(a) principal: GONZAGA, Ana Rafaela Mota
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Federal de Pernambuco
UFPE
Brasil
Programa de Pos Graduacao em Biologia Animal
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Cobra venenosa- veneno
Fosfolipase A2
Trombina
Link de acesso: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/27503
Resumo: OGATA, Miriam Camargo Guarnieri, também é conhecido(a) em citações bibliográficas por: GUARNIERI, Miriam Camargo
id UFPE_ac08ceedd7210879b196cb94221412c0
oai_identifier_str oai:repositorio.ufpe.br:123456789/27503
network_acronym_str UFPE
network_name_str Repositório Institucional da UFPE
repository_id_str
spelling Isolamento e caracterização estrutural e biológica de fosfolipases ácidas da peçonha de cascavel (Crotalus durissus cascavella)Cobra venenosa- venenoFosfolipase A2TrombinaOGATA, Miriam Camargo Guarnieri, também é conhecido(a) em citações bibliográficas por: GUARNIERI, Miriam CamargoCrotalus durissus cascavella é uma subespécie endêmica da região Nordeste do Brasil, cuja peçonha difere das demais subespécies do país pela ausência de crotamina e alta concentração de fosfolipases A₂ (PLA₂) ácidas. Neste estudo, duas novas PLA₂s ácidas, denominadas Cdca-I-PLA₂ e Cdca-II-PLA₂, foram purificadas da peçonha de C. d. cascavella através de duas e três etapas cromatográficas, respectivamente. A pureza e homogeneidade de ambas fosfolipases foram determinadas por SDS-PAGE e espectrometria de massa, apresentando uma banda única e massa de 14.247 Da (Cdca-IPLA₂) e 14.418 Da (Cdca-II-PLA₂). Ambas fosfolipases foram ativas sobre 4-nitro-3- ácido octanoil benzóico, apresentando atividade específica de 11,51 ± 0,50 U/mg e 26,75 ± 0,15 U/mg, Km = 0,2280 mM e 0,3993 mM e Vmax = 13,15 nmol×min⁻¹mg⁻¹ e 39,68 nmol×min⁻¹mg⁻¹, respectivamente. Ambas não apresentaram atividade sobre BApNA. A Cdca-I-PLA₂ apresentou atividade hemaglutinante na dose de 15 μM, enquanto a Cdca- II-PLA₂ apresentou atividade sobre substrato fluorogênico de trombina nas doses de 15 μM e 30 μM. As Cdca-I-PLA₂ e Cdca-II-PLA₂ reduziram a agregação plaquetária induzida por colágeno, adrenalina e ácido araquidônico, porém as duas enzimas (20 μM) não reduziram a agregação quando ADP foi utilizado como agonista. Cdca-I-PLA₂ apresentou atividade dose resposta como agonista de agregação em plaquetas lavadas e reduziu significativamente a atividade agregante plaquetária da trombina. Cdca-I-PLA₂ apresentou maior atividade anticoagulante, prolongando os tempos de protrombina (TP; 30 μM; R = 22) e tromploplastina parcial ativada (TTPa; 30 μM; R = 10), porém não promoveu alteração do tempo de trombina (TT) na dose de 10 μM. Cdca-II-PLA₂ prolongou discretamente o TP (30 μM; R = 2) e TTPa (30 μM; R = 1,5) e significativamente o TT (20 μM; R = 7). Desta forma, nossos resultados sugerem que a Cdca-I-PLA₂ é uma quimerolectina anticoagulante com importante atividade sobre agregação plaquetária, enquanto Cdca-II-PLA₂ possui alta atividade enzimática, inibe tanto a agregação plaquetária quanto a coagulação, agindo como inibidor de trombina por meio da sua ligação com o fibrinogênio.CAPESCrotalus durissus cascavella is ana endemic subspecie from Northeast region of Brazil, whose venom differs from the other subspecies of the country due to the absence of crotamine and high concentration of acidic phospholipase A₂ (PLA₂). In this study, two new acidic PLA₂s, named Cdca-I-PLA₂ and Cdca-II-PLA₂, were purified from C. d. cascavella venom by two and three chromatographic steps, respectively. The purity and homogeneity of both phospholipases were determined by SDS-PAGE and mass spectrometry, showing a single band and molecular mass of 14.247 Da (Cdca-I-PLA₂) and 14.418 Da (Cdca-II-PLA₂). Both PLA₂s were active on 4-Nitro-3-(octanoyloxy) benzoic, presenting specific activity of 11,51 ± 0,50 U/mg and 26,75 ± 0,15 U/mg, Km = 0,2280 mM and 0,3993 mM and Vmax = 13,15 nmol×min⁻¹mg⁻¹ and 39,68 nmol×min⁻¹mg⁻¹, respectively. Both had no activity on BApNA. The Cdca-I-PLA₂ showed hemagglutinating activity at the dose of 15 μM, while Cdca-II-PLA₂ showed activity on fluorogenic thrombin substrate at the doses of 15 μM e 30 μM. The Cdca-I-PLA₂ and Cdca-II-PLA₂ reduced platelet aggregation induced by collagen, adrenaline and arachidonic acid, but the two enzymes (20 μM) did not reduce aggregation when ADP was used as an agonist. Cdca-I-PLA₂ showed dose response activity as agonist of aggregation in washed platelets and significantly reduced thrombin platelet aggregation activity. Cdca-I-PLA₂ presented higher anticoagulant activity, prolonging prothrombin time (PT; 30 μM; R = 22) and activated partial thromboplastin time (aPTT; 30 μM; R = 10), but did not promote a change in thrombin time (TT) at a dose of 10 μM. Cdca-IIPLA₂ prolonged discreetly the PT (30 μM; R = 2) and the aPTT (30 μM; R = 1.5) and significantly prolonged the TT (20 μM; R = 7). Thus, our results suggest that Cdca IPLA₂ is an anticoagulant chimerolectin with important activity on platelet aggregation, while Cdca-II-PLA₂ has high enzymatic activity, inhibit both platelet aggregation and cloagulation, acting as thrombin inhibitor through its biding to fibrinogen.Universidade Federal de PernambucoUFPEBrasilPrograma de Pos Graduacao em Biologia AnimalOGATA, Miriam Camargo GuarnieriFERREIRA, Rodrigo da Silvahttp://lattes.cnpq.br/2783772791942226http://lattes.cnpq.br/6841831386158907GONZAGA, Ana Rafaela Mota2018-11-14T19:23:42Z2018-11-14T19:23:42Z2017-02-20info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/27503ark:/64986/001300000tdj3porAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPE2019-10-26T03:57:59Zoai:repositorio.ufpe.br:123456789/27503Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufpe.br/oai/requestattena@ufpe.bropendoar:22212019-10-26T03:57:59Repositório Institucional da UFPE - Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)false
dc.title.none.fl_str_mv Isolamento e caracterização estrutural e biológica de fosfolipases ácidas da peçonha de cascavel (Crotalus durissus cascavella)
title Isolamento e caracterização estrutural e biológica de fosfolipases ácidas da peçonha de cascavel (Crotalus durissus cascavella)
spellingShingle Isolamento e caracterização estrutural e biológica de fosfolipases ácidas da peçonha de cascavel (Crotalus durissus cascavella)
GONZAGA, Ana Rafaela Mota
Cobra venenosa- veneno
Fosfolipase A2
Trombina
title_short Isolamento e caracterização estrutural e biológica de fosfolipases ácidas da peçonha de cascavel (Crotalus durissus cascavella)
title_full Isolamento e caracterização estrutural e biológica de fosfolipases ácidas da peçonha de cascavel (Crotalus durissus cascavella)
title_fullStr Isolamento e caracterização estrutural e biológica de fosfolipases ácidas da peçonha de cascavel (Crotalus durissus cascavella)
title_full_unstemmed Isolamento e caracterização estrutural e biológica de fosfolipases ácidas da peçonha de cascavel (Crotalus durissus cascavella)
title_sort Isolamento e caracterização estrutural e biológica de fosfolipases ácidas da peçonha de cascavel (Crotalus durissus cascavella)
author GONZAGA, Ana Rafaela Mota
author_facet GONZAGA, Ana Rafaela Mota
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv OGATA, Miriam Camargo Guarnieri
FERREIRA, Rodrigo da Silva
http://lattes.cnpq.br/2783772791942226
http://lattes.cnpq.br/6841831386158907
dc.contributor.author.fl_str_mv GONZAGA, Ana Rafaela Mota
dc.subject.por.fl_str_mv Cobra venenosa- veneno
Fosfolipase A2
Trombina
topic Cobra venenosa- veneno
Fosfolipase A2
Trombina
description OGATA, Miriam Camargo Guarnieri, também é conhecido(a) em citações bibliográficas por: GUARNIERI, Miriam Camargo
publishDate 2017
dc.date.none.fl_str_mv 2017-02-20
2018-11-14T19:23:42Z
2018-11-14T19:23:42Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/27503
dc.identifier.dark.fl_str_mv ark:/64986/001300000tdj3
url https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/27503
identifier_str_mv ark:/64986/001300000tdj3
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/
info:eu-repo/semantics/openAccess
rights_invalid_str_mv Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.publisher.none.fl_str_mv Universidade Federal de Pernambuco
UFPE
Brasil
Programa de Pos Graduacao em Biologia Animal
publisher.none.fl_str_mv Universidade Federal de Pernambuco
UFPE
Brasil
Programa de Pos Graduacao em Biologia Animal
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UFPE
instname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)
instacron:UFPE
instname_str Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)
instacron_str UFPE
institution UFPE
reponame_str Repositório Institucional da UFPE
collection Repositório Institucional da UFPE
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UFPE - Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)
repository.mail.fl_str_mv attena@ufpe.br
_version_ 1846272940230836224

Registros relacionados