Avaliação da expressão e localização subcelular de proteínas GP63 parálogas em espécies de Leishmania

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2021
Autor(a) principal: DUTRA, Allana Kelly Oliveira
Orientador(a): MELO NETO, Osvaldo Pompilio de
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso embargado
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Federal de Pernambuco
Programa de Pós-Graduação: Programa de Pos Graduacao em Genetica
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Brasil
Palavras-chave em Português:
Proteína de virulência
Genes parálogos
Leishmania
Link de acesso: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/40672
Resumo: MELO NETO, Osvaldo Pompilio de, também é conhecido(a) em citações bibliográficas por: de MELO NETO, Osvaldo Pompilio
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spelling DUTRA, Allana Kelly Oliveirahttp://lattes.cnpq.br/7146818348038988http://lattes.cnpq.br/6769466465877287MELO NETO, Osvaldo Pompilio deSANTOS, Wagner José Tenório dos2021-07-26T19:12:25Z2021-07-26T19:12:25Z2021-01-29DUTRA, Allana Kelly Oliveira. Avaliação da expressão e localização subcelular de proteínas GP63 parálogas em espécies de Leishmania. 2021. Dissertação (Mestrado em Genética) – Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2021.https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/40672MELO NETO, Osvaldo Pompilio de, também é conhecido(a) em citações bibliográficas por: de MELO NETO, Osvaldo PompilioParasitas flagelados do gênero Leishmania, agentes etiológicos da leishmaniose, apresentam como importante fator de virulência a protease GP63, codificada por um número grande de genes parálogos localizados em cromossomos distintos (10, 28 e 31). O significado funcional destes múltiplos parálogos permanece desconhecido, porém estudos prévios implicaram os genes localizados no cromossomo 10 na patogênese no hospedeiro mamífero. Estes genes foram classificados em grupos diferentes baseados na extremidade C-terminal dos respectivos polipeptídios. Este estudo buscou avaliar representantes desses grupos quanto a sua expressão e localização subcelular em L. braziliensis e L. infantum, buscando identificar diferenças funcionais. Para isso foram utilizados soros produzidos contra peptídeos encontrados em GP63 de L. braziliensis, sendo dois encontrados em parálogos específicos e um terceiro conservado em todos aqueles com genes localizados no cromossomo 10. Testes com proteínas recombinantes primeiro nos permitiram confirmar especificidades distintas em relação aos parálogos de GP63 para os anticorpos gerados. Estes foram então utilizados para se avaliar a expressão da proteína ao longo de curvas de crescimento de formas de vida de ambas as espécies. Com isso observou-se a expressão muitas vezes simultânea, porém com perfis distintos, de diferentes parálogos. Perfis distintos de localização subcelular também foram identificados com os diferentes anticorpos em frações proteicas dos parasitas produzidas com digitonina. Por fim, ensaios de imunofluorescência confirmaram a localização em membrana de ao menos um grupo de parálogos. Estes estudos evidenciam diferenças claras entres parálogos distintos que, entretanto, ainda necessitam ser melhor caracterizadas.CNPqFlagellated parasites of the Leishmania genus, etiologic agents of leishmaniasis, have the protease GP63 as an important virulence factor, encoded by a large number of related genes localized on different chromosomes (10, 28 and 31). The functional significance of these multiple paralogues remains unknown, but previous studies have implicated genes localized on chromosome 10 in the pathogenesis of the mammalian host. These genes were classified into different groups based on the C-terminal end of the respective polypeptides. This study sought to evaluate representatives of these groups regarding their expression and subcellular location in L. braziliensis and L. infantum, seeking to identify functional differences. For this, sera produced against peptides found in L. braziliensis GP63 were used, two found in specific paralogues and a third preserved in all those encoded by genes localized on chromosome 10. Tests with recombinant proteins first allowed us to confirm distinct specificities in relation to the GP63 paralogues for the generated antibodies. These were then used to evaluate the protein’s expression along growth curves of life forms of both species. As a result, mostly simultaneous expression, but with different profiles, were observed for different paralogues. Different profiles of subcellular location were also identified with the different antibodies in parasite’s protein fractions produced with digitonin. Finally, immunofluorescence assays confirmed the membrane location of at least one group of paralogues. These studies show clear differences between different paralogues that, however, still need to be better characterized.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em GeneticaUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/embargoedAccessProteína de virulênciaGenes parálogosLeishmaniaAvaliação da expressão e localização subcelular de proteínas GP63 parálogas em espécies de Leishmaniainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPEORIGINALDISSERTAÇÃO Allana Kelly Oliveira Dutra.pdfDISSERTAÇÃO Allana Kelly Oliveira Dutra.pdfapplication/pdf4429313https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/40672/1/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Allana%20Kelly%20Oliveira%20Dutra.pdfba40de077bf4d51999f65b1d03c09b9fMD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82310https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/40672/3/license.txtbd573a5ca8288eb7272482765f819534MD53CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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