Aplicações biotecnológicas em feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.] visando a obtenção de tolerância a estresses bióticos e abióticos

• Ano de defesa: 2013
• Autor(a) principal: AZEVEDO, Hayana Millena de Arruda
• Orientador(a): BENKO-ISEPPON, Ana Maria
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Pernambuco
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pos Graduacao em Ciencias Biologicas
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Organismos transgênicos; Feijão-de-corda; Engenharia genética vegetal
• Link de acesso: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/25368

O feijão-caupi (Vigna unguiculata) vem aumentando gradativamente seu potencial produtivo. Contudo, a área colhida, a produção e a produtividade oscilam muito em virtude das variações climáticas, bem como os ataques de pragas e patógenos. Estudos moleculares aliados a ferramentas biotecnológicas, como a transgenia e a mutagênese, podem contribuir na redução dos problemas gerados pelos estresses. O presente trabalho teve como objetivo inserir um gene ligado à defesa na cultivar BRS Tumucumaque de feijão-caupi, conferindo-lhe maior tolerância a estresses bióticos. Para obtenção dos resultados, foi utilizada a metodologia de transferência direta de genes via Biobalística. Foram bombardeados cerca de 700 embriões e cinco exemplares (0,7%) passaram por todas as etapas da pressão de seleção, chegando à aclimatação. Uma vez aclimatadas, realizou-se a análise por PCR. Para confirmação da transformação foi feito uso do conjunto de primers pAHAS 124/pAHAS 500. Os primersforam utilizados para amplificar uma sequência de 624 pb e, em conjunto com a sequência codificante, cerca de 750 pb. Em um segundo momento, também objetivou-se gerar mutantes com características de tolerância a estresse salino, fazendo uso da mutagênese in vitro através de irradiação por raios gama sobre o desenvolvimento in vitro da cv. BR14-Mulato.Inicialmente, foi estabelecido um protocolo apropriado para pressão de seleção in vitro das sementes irradiadas, fazendo-se uso das concentrações de 172 mM, 258 mM, 344 mM e 0 mM, chegando-se, então, à conclusão de que a concentração de 172 mM seria a mais apropriada. Por fim, sementes foram irradiadas com três doses de radiação gama (100 Gy, 150 Gy e 200 Gy), além do material controle (0 Gy), e seus tecidos foram isolados e inoculados, simultaneamente, em meios de cultura com e sem sal. Como resultado, foi obtido um possível variante somaclonal advindo de material não irradiado e inoculado em meio não seletivo, sendo transferido, posteriormente, para meio contendo NaCl, sobrevivendo a este. Outro resultado de grande importância foi a obtenção de um provável mutante sólido provocado pela dose de 150 Gy que, inicialmente, formou calo embriogênico na ausência de NaCl, sendo posto sob pressão de seleção na etapa conseguinte.