Desenvolvimento e atividade biológica de lipossomas sítio-específicos contendo ácido úsnico para o tratamento da tuberculose

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: CARVALHO, Rafaela de Siqueira Ferraz
• Orientador(a): MAGALHÃES, Nereide Stela Santos
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pos Graduacao em Ciencias Biologicas
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Tuberculose; Macrófagos; Farmacologia
• Link de acesso: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/15334

A utilização de sistemas de liberação controlada de fármacos de base nanotecnológica, a exemplo dos lipossomas, representa atualmente um grande avanço no tratamento e diagnóstico de várias doenças. Modificações na superfície desses nanossistemas vêm sendo foco nas pesquisas, com objetivo de maximizar a eficácia e segurança dos mesmos, a partir do desenvolvimento de sistemas de longa circulação e/ou sítio-específicos. Neste trabalho, a fucana, um polissacarídeo sulfatado, foi utilizada como molécula de revestimento da superfície de lipossomas, uma vez que apresenta duas propriedades importantes: a capacidade de não ativar o sistema complemento, e a de ser reconhecida e poder se ligar à receptores encontrados na superfície de macrófagos. Essas duas propriedades nos encorajaram a utilizar a fucana com o propósito de desenvolver um novo sistema lipossomal de longa circulação e direcionado para macrófagos. Assim, a primeira etapa deste estudo envolveu uma síntese química, na qual a fucana foi modificada quimicamente por meio de sua conjugação com o colesterol (fucana hidrofobizada), através de um novo procedimento de irradiação por micro-ondas. Posteriormente, lipossomas revestidos com fucana contendo ácido úsnico foram preparados pelo método de hidratação do filme lipídico, variando as quantidades de fucana hidrofobizada. Os lipossomas foram caracterizados por determinação do tamanho da partícula, índice de polidispersão (PDI), carga de superfície (ζ) e eficiência de encapsulação do fármaco. Além disso, os lipossomas foram avaliados em estudos in vitro de citotoxicidade, captura celular e pelo método de competição de inibidores por receptores específicos frente a macrófagos RAW 264.7. Por fim, a atividade antimicobacteriana e interações entre fármacos foram avaliada pelo método chekerboard contra isolados de Mycobacterium tuberculosis multirresistentes. Os resultados obtidos evidenciaram que a fucana modificada quimicamente foi capaz de ser utilizada no desenvolvimento de lipossomas revestidos. Observou-se que a variação da quantidade de fucana de 5 para 20 mg promoveu um aumento no tamanho e no PDI das vesículas de 168 ± 2,82 nm, 0,36 para 1,18 ± 0,01μm, 0,46, respectivamente. Por outro lado, com o aumento da concentração de fucana, o ζ diminuiu (1,35 ± 0,185 mV para -5,41 ± 0,234 mV), visto que a mesma é um polissacarídeo negativo. Em relação à taxa de encapsulação, todas as formulações apresentaram valor superior a 98% indicando que o revestimento com fucana não alterou a encapsulação do ácido úsnico. Os estudos de citotoxicidade revelaram que as formulações lipossomais revestidos com fucana, exibiram valores de IC50 inferiores (12.70 ± 1,56μM) em comparação aos lipossomas sem revestimento IC50= 18,37 ± 3,24 μM). Em relação à captura celular, os resultados mostraram que os lipossomas revestidos foram capturados de forma mais rápida (15 min) que os lipossomas sem revestimentos (60 min) podendo sugerir que foram mais rapidamente reconhecidos pelos macrófagos. Adicionalmente, os resultados obtidos no experimento de inibidores competitivos sugerem que os lipossomas revestidos pela fucana (Lipofuc5) foram internalizados através do “scavenger receptors” (SR) presente na superfície dos macrófagos. Nos estudos utilizando isolados de M. tuberculosis multirresistentes, a encapsulação do ácido úsnico em lipossomas potencializou a atividade antimicobacteriana deste composto liquênico, além de apresentar um efeito sinérgico com a ripamficina. Esses sistemas apresentam, portanto, um potencial como candidatos à melhoria da atividade antimicobacteriana da rifampicina. Diante do exposto, os lipossomas revestidos com fucana contendo ácido úsnico apresentam-se como uma alternativa para o direcionamento eficiente de fármacos aos macrófagos.