Construção de quimeras recombinantes contendo antígenos de Bartonella henselae

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Gonçalves, Jênifer Malheiros
• Orientador(a): Hartwig, Daiane Drawanz
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Pelotas
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
• Departamento: Centro de Desenvolvimento Tecnológico
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Proteína recombinante; CSD; Doença da arranhadura do gato; In silico; Diagnóstico; Recombinant protein; Cat scratch disease; Diagnosis
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA::PATOLOGIA ANIMAL
• Link de acesso: http://guaiaca.ufpel.edu.br/handle/prefix/8866

Bartonella henselae é uma bactéria Gram-negativa e intracelular facultativa, onde os gatos são seu reservatório primário e os seres humanos seus hospedeiros acidentais. B. henselae é causadora da zoonose conhecida como Doença da Arranhadura do Gato (Cat Scratch Disease - CSD). O diagnóstico da CSD ainda é um desafio, pois as técnicas convencionais de detecção de antígenos ou anticorpos têm demonstrado limitações. O diagnóstico padrão-ouro da CSD é a Imunofluorescência, com boa sensibilidade, entretanto, com possibilidade de reações cruzadas com outras espécies. Diante disto, as ferramentas de bioinformática têm sido utilizadas em todo o mundo, otimizando a busca por novas alternativas de diagnóstico. Assim, o objetivo do presente trabalho foi identificar, através de análises de imuno-bioinformática, epítopos de B. henselae, e construir quimeras recombinantes multi-epítopo para uso como insumos biotecnológicos. Os sete antígenos mais citados em artigos científicos (GroEL, 17kDa, P26, BadA, Pap31, OMP89 e OMP43) foram escolhidos para a fase de identificação e seleção dos epítopos. Os epítopos de células B foram selecionados usando dois preditores (BepiPred e Iedb). O estudo tridimensional das proteínas, bem como análises de qualidade estrutural, análises físico-químicas e de antigenicidade foram feitos através do servidor I-TASSER, QMEAN6 e do servidor Protoparam, respectivamente. A análises das estruturas secundárias do mRNA foram performadas para verificar a estabilidade da tradução das proteínas através do software RNAfold. A seguir, o desenho in silico das quimeras foi feito e as mesmas enviadas para síntese química. Três quimeras recombinantes (rC) foram constituídas, sendo elas compostas por epítopos presentes nas proteínas GroEL, 17kDa e P26 (rC1); BadA, Pap31 e GroEL (rC2) e P26, OMP89 e OMP43 (rC3). As quimeras recombinantes (rC) foram clonadas em vetor de expressão em Escherichia coli, pAE. A antigenicidade das proteínas foi verificada através de Western Blot (WB) com soro de humano naturalmente infectado por B. henselae. Todas as proteínas quiméricas foram expressas com sucesso, de forma insolúvel, e com massa molecular esperada de 36 kDa (rC1), 34 kDa (rC2) e 38 kDa (rC3). As análises de qualidade demonstraram quea rC2 foi a construção ligeiramente melhor que as demais. As análises das estruturas secundárias do mRNA revelaram que estes tinham estabilidade suficiente para traduzir efetivamente as proteínas. Todas as quimeras mostraram-se antigênicas através do WB. As quimeras recombinantes produzidas têm potencial para uso biotecnológico no desenvolvimento de testes de diagnóstico.